שתף:
בסיס מכתים שלילי, טכניקה, יתרונות וחסרונות
ה מכתים שליליים זוהי שיטת צביעה מיוחדת כדי להדגיש את נוכחותו של הקפסולה בכמה מיקרואורגניזמים - בעיקר סטרפטוקוקוס דלקת ריאות, דלקת ריאות של קלבסילה ו Cryptococcus neoformans-, מדגימות קליניות או תרבויות טהורות.
מדגם ישיר נפוץ להחיל מכתים שליליים הוא הנוזל השדרתי. טכניקה זו מייצגת חלופה מהירה עבור האבחנה המשוערת של דלקת קרום המוח, במיוחד Cryptococcus neoformans.
כמו כן, כתם זה יכול להיות מיושם על כיח נוזלים סטריליים בכלל, כמו גם על זנים המתקבל תרבויות טהורות צעירים. טכניקה זו משתמשת nigrosine או דיו סינית לביצועו; לכן, זה מתודולוגיה פשוטה מאוד כלכלית ליישם המספק מידע של ערך אבחון גדול בתוך זמן קצר.
במובן זה, כל מעבדה מסוגלת לבצע את הצבע. כמובן, המעבדה חייבת להיות צוות מוכשר, מסוגל לזהות את השמרים של Cryptococcus neoformans מבודד או נבדל ולהבדיל אותם leukocytes ו artifacts כי המדגם עשוי להציג.
אינדקס
- 1 קרן
- 2 טכניקה
- 2.1 חומרים
- 2.2 מפרט הדגימה
- 2.3 ביצוע הטכניקה בדגימות ישירות
- 2.4 ביצוע הטכניקה עם זנים מהתרבות
- 2.5 תצפית במיקרוסקופ
- 3 יתרונות
- 4 חסרון
- 5 מכתים רקמות עם דיו הודית
- 6 הפניות
קרן
ניגרוסין והדיו ההודי פועלים באופן דומה; לכן, אחד משני החומרים ניתן להשתמש לסירוגין.
טכניקה זו נקראת מכתים שלילי כי זה פועל בניגוד לשאר טכניקות צביעה. במה זה נשאר ללא כתם הוא המבנה כי הוא ביקש או שאתה רוצה לראות; כלומר, המיקרואורגניזמים.
לכן, צבע מבוסס על צביעה את התחתית למרוח בצבע כהה. בתרחיש זה המבנים הכתומים יהיו מודגשים בצבע בהיר או חסר צבע.
באופן כללי, שמרים נראות refringent, מוקף הילה ברורה התואמת את הקפסולה. זה קורה כי דיו סינית ניגרוסין הם חומרים שאינם מסוגלים לחדור את סוכרת היוצרת את הקפסולה של מיקרואורגניזמים חיים.
ראוי לציין כי מבנים אחרים אשר עשויים להיות נוכחים במדגם ישיר, כגון לויקוציטים או תאי דם אדומים, לא לחדור.
עכשיו, אם מיקרואורגניזמים מתים, תמיסת יכול לחדור בתוכם, בצורה כזו כי מכתים זה גם שימושי כדי להעריך את הכדאיות של מיקרואורגניזמים.
טכניקה
חומרים
ניגרוסין
הניגרוסין חייב את שמו לצבע השחור שיש לו. מדובר בחומר סינתטי שהושגו על ידי חימום תערובת של-כגון תרכובות אורגניות כגון nitrobenzene, אנילין ו אנילין hydrochlorite של שימוש זרז בתגובה אמר (ברזל או נחושת).
דיו סינית
הדיו הסיני הוא חומר המשמש בעיקר את האסיאנים לכתיבה, יצירת יצירות אמנות וציור מונוכרומטי. זה מאוד פופולרי בתרבות הסינית.
הוא מתקבל דיו דיונון מעורבב עם פחם כתוש, תוצר של שריפת עצים שרף קטן.
אפשר גם להכין פיח מן לשריפת פחמימנים (שמנים צמחיים), יחד עם חלבון שנותן עקביות ג'לטין המתאימה כדי למנוע משקעים של חלקיקי פחמן.
מפרט עבור הדגימה
- לא דורש צום.
- המדגם של CSF, כיח או נוזל סטרילי חייב להכיל לפחות 1 מ"ל של נפח ויש להעביר לטמפרטורת החדר במעבדה מיד.
- CSF ו נוזל סטרילי דגימות צריך לקחת על ידי רופא מיוחד.
- זה יכול להיות גם תרבות טהורה של זן חשוד קשור הפתוגנים הנ"ל.
ביצוע הטכניקה עם דוגמאות ישירות
- הדגימות חייב להיות centrifuged, ואז supernatant הוא נמחק ואת המשקעים נלקח.
- טיפה של החומר צנטריפוגה (משקעים) וטיפה של דיו סינית או ניגרוסין ממוקמות על שקופית נקייה..
- זה צריך להיות מעורב היטב מכוסה כיסוי להחליק, ומאפשר ירידה להתפשט כמו סרט דק מבלי לחרוג הקצוות.
- לאחר מכן הכנה מותקן במיקרוסקופ.
- אם ההכנה חשוכה מדי, זה יכול להיות מדולל במים.
ביצוע הטכניקה עם זנים מהתרבות
- חלק קטן מאוד של יבול צעיר הוא נלקח עם מחט זרע ו מומס טיפה של דיו סינית שהונחו בעבר על שקופית נקייה.
- A coverslip ממוקם על גבי.
- הוא נצפה במיקרוסקופ ב 10X ולאחר מכן ב 40X.
אתה יכול גם להמיס חלק של המושבה במים מזוקקים, ומשם לקחת טיפה ומערבבים אותו עם הדיו. בדרך זו ההכנה לא תהיה כל כך עבה, מה שמאפשר לצפות במבנים בבידוד; אם יש agglomerations, זה לא יהיה נצפה היטב.
מתודולוגיה נוספת היא:
- מניחים טיפה של תרבות ההשעיה בקצה אחד של השקופית.
- מניחים טיפה של nigrosine על אותו קצה ומערבבים.
- בעזרת שקופית נוספת, להאריך את המדגם כאילו אתה עושה כתם hematological.
- בואו לייבש ולהתבונן תחת המיקרוסקופ.
התבוננות במיקרוסקופ
ראשית עליך להתמקד עם המטרה 10X יש תצוגה רחבה של השדה. לאחר מכן אתה צריך לחפש אם יש רווחים ברורים; אם יש, להתמקד עם 40X כדי לראות את הפרטים.
יתרונות
- קל לביצוע.
- זוהי טכניקה כלכלית.
- שיטה זו אינה דורשת כי להכתים להיות קבועים חום או כימיקלים; לכן, מיקרואורגניזמים הם נצפו ללא עיוותים.
- ההכנות טריים לא צריך להיות מיובש, כך ניתן לראות מיד, לייצר תוצאות במהירות.
חסרון
לאחר התאספו, ההכנות טריים יש לראות מיד; אם מותר להם להתייבש, כבר לא ניתן לצפות בהם וחדש.
מכתים רקמות בדיו הודית
פונקציה נוספת שהדיו הסיני יכול למלא היא במעבדות הפתולוגיה. זה מוחל על דגימות רקמות מוסר כירורגי על מנת לסמן את השוליים של כריתה הגידול.
הרקמה המסומנת מרוסנת בחומצה אצטית. זה פועל בתור מתנגד ומונע את הדיו מן יורד כאשר הרקמה כפופה עיבוד שגרתי להכנת ביופסיה.
הנוהל מורכב רחצה רקמות באלכוהול קסילן, ולאחר מכן imbibing שעווה פרפין. סימון זה מנחה את הפתולוג בעת התבוננות ברקמה, המציין היכן המרווח של כריתה כירורגית או נקודת עניין אחרת היא.
הפניות
- "Nigrosina". ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. 11 Jul 2017, 22:46 UTC. 6 ינואר 2019, 16:56: en.wikipedia.org
- "דיו סינית". ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. אוקטובר 1 2018, 03:08 UTC. 6 Jan 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
- סילבה L, סילבה C, פרננדס N, בואנו C, טורס J, ריקו M, Macías J ומשתפי פעולה. (2006). אנשי כוח אדם של הקהילה האוטונומית של אקסטרמדורה. סדר היום הספציפי הרביעי. עריכה MAD. סביליה-ספרד, עמ '211-212.
- סילבה M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). מומחה טכנאי מעבדה, של שירות הבריאות גליציאנית (SERGAS). נושא משנה נפח ספציפי 2. MAD העריכה. סביליה-ספרד, עמ '79-80.
- פורבס B, סחם D, Weissfeld A. 2009. אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. ארגנטינה Panamericana S.A העריכה