Ziehl-Neelsen כתם קרן, ריאגנטים וטכניקה

ה כתם זיהל-נילסן ב טכניקה צביעה לזהות מיקרואורגניזמים עמיד חומצה אלכוהול (AAR). שמו של הליך מיקרוביולוגיה זה מתייחס למחבריו: הבקטריולוג פרנץ זיהל והפתולוג פרידריך נילסן.

טכניקה זו היא סוג של צבע דיפרנציאלי, אשר מרמז על שימוש בצבעים שונים על מנת ליצור ניגודיות בין המבנים שאתה רוצה להתבונן, להבדיל לזהות מאוחר יותר. כתם Ziehl-Neelsen משמש לזיהוי סוגים מסוימים של מיקרואורגניזמים.

כמה מיקרואורגניזמים אלה הם mycobacteria (למשל, שחפת Mycobacterium), nocardias (למשל, נוקרדיה sp.) וכמה טפילים תאיים (למשל, Cryptosporidium parvum). רבים מן החיידקים ניתן לסווג באמצעות טכניקה נפוצה הנקראת גרם הכתם.

עם זאת, כמה קבוצות חיידקים דורשים שיטות אחרות כדי לזהות אותם. טכניקות כגון מכתים Ziehl-Neelsen דורשים שילובים של צבעים עם חום כדי לתקן את הראשון לקיר התא.

ואז מגיע תהליך דהוי המאפשר שתי תוצאות: התנגדות או רגישות לדהות על ידי חומצות ואלכוהול.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 צביעה משנית
• 2 ריאגנטים
  • 2.1 צביעה ראשונית
  • 2.2 פתרון דהקולוריזציה
  • 2.3 צביעה משנית (אנטי-צבעונית)
• 3 טכניקה
  • 3.1 תהליך חומצה מהירה מכתים
• 4 הפניות

קרן

הבסיס של טכניקה זו מכתים מבוססת על המאפיינים קיר התא של מיקרואורגניזמים אלה. הקיר נוצר על ידי סוג של חומצות שומן הנקראות חומצות מיקוליות; אלה מאופיינים בשלשלאות ארוכות מאוד.

כאשר חומצות שומן יש מבנים ארוכים מאוד, הם יכולים לשמור על צבעים בקלות רבה יותר. כמה סוגים של חיידקים הם מאוד קשה הכתם על ידי כתם גרם, בשל התוכן חומצה mycolic גבוהה של קיר התא.

ב Ziehl-Neelsen הכתם, פנול מורכב פנצ'ין פנול, צבע בסיסי, משמש. זה יש את היכולת לתקשר עם חומצות השומן של קיר התא, אשר מרקם דונגי בטמפרטורת החדר.

מכתים fuchsin קרבול משופרת בנוכחות חום, כי שעווה נמס ואת מולקולות צבע לנוע מהר יותר לתוך הקיר התא.

החומצה המשמשת לאחר מכן משמשת לזיהוי התאים שלא הוכתמו משום שהקיר שלהם לא היה קשור מספיק לצבע; לכן, את הכוח של decolorizer חומצה מסוגל להסיר את צבע חומצה. התאים המתנגדים זה שינוי צבע נקראים חומצה עמידים.

צביעה משנית

לאחר שינוי הצבע של המדגם, זה מנוגד לצבע נוסף שנקרא צבע משני. Methylene כחול או ירוק מלכיט משמש בדרך כלל.

צבע משני מכתים את חומר הרקע, וכתוצאה מכך, יוצר בניגוד המבנים שהיו צבועה בשלב הראשון. רק את התאים דהוי לקלוט את הצבע השני (אנטי כתם) ולקחת את הצבע שלהם, ואילו תאים עמידים חומצה לשמור על צבע אדום.

הליך זה משמש לעתים קרובות לזיהוי שחפת Mycobacterium ו Mycobacterium leprae, אשר נקראים חומצה מהירה bacilli.

ריאגנטים

צביעה ראשונית

Carboxin 0.3% fuchsin (מסונן) משמש. צבע זה מוכן מתערובת של אלכוהול: פנול באתנול (90%) או מתנול (95%), ובתערובת זו 3 גרם של פוקסין בסיסי מומסים.

פתרון decolorizing

בשלב זה ניתן להשתמש בפתרונות של חומצה 3% אלכוהול או 25% חומצה גופרתית.

צבע משני (אנטי-צבעוני)

צבע הכי נפוץ לבצע את הניגוד בדגימות הוא בדרך כלל 0.3% מתילן כחול. עם זאת, אחרים יכולים לשמש גם, כגון 0.5% מלכיט ירוק.

טכניקה

נוהל חומצה מהירה מכתים

הכן כתם חיידקי

הכנה זו מתבצעת על שקופית נקייה ויבשה, בעקבות אמצעי זהירות סטריליות.

ייבוש המריחה

אפשר למרוח להתייבש בטמפרטורת החדר.

מחממים את המדגם

המדגם חייב להיות מחומם על ידי הפעלת אש לשקופית למטה. קיבעון עם אלכוהול ניתן לעשות כאשר המריחה לא הוכנה עם כיח (מטופלים עם hypochlorite נתרן כדי להלבין אותו) ואם זה לא הולך להיות צבוע מיד..

מ 'שחפת זה בוטל עם אקונומיקה במהלך תהליך מכתים. Thermofixing של untreated כיח לא יהרגו מ 'שחפת, ואילו קיבוע עם אלכוהול הוא bactricidal.

מכסים את הכתם

הכתם הוא מכוסה פתרון פוקסין קרבול (כתם בסיסי העיקרי).

מחממים את הכתם

זה נעשה במשך 5 דקות. אתה צריך להבחין שחרור אדי (כ 60 ° C). חשוב לא להתחמם יתר על המידה ולהימנע שריפת המדגם.

לגבי החימום של הכתם, בזהירות רבה יש לנקוט בעת חימום קרבוול fuchsin, במיוחד אם מכתים מתבצעת על מגש או מיכל אחר שבו כימיקלים דליקים מאוד נאספו מן הכתם הקודם.

רק להבה קטנה צריך להיות מיושם תחת שקופיות באמצעות ספוג מואר בעבר לחלח עם כמה טיפות של אלכוהול חומצה, מתנול או אתנול 70%. הימנע משימוש גדול ספוג ספוג באתנול כי זה מפגע אש.

שטפו את הכתם

כביסה זו צריכה להיעשות עם מים נקיים. אם מי הברז אינו נקי, לשטוף את המריחה עם מים מסוננים או מזוקקים, רצוי.

מכסים את כתם עם חומצה אלכוהול

זה חומצה אלכוהול צריך להיות ב 3%. הכיסוי מתבצע במשך 5 דקות או עד שהכתם דהוי דיו, כלומר ורוד בהיר.

יש לקחת בחשבון כי אלכוהול חומצי הוא דליק; לכן, יש להשתמש בו בזהירות רבה. הימנע להיות ליד מקורות ההצתה.

שטפו את הכתם

הכביסה צריכה להיות עם מים נקיים מזוקקים.

מכסים את כתם עם צבע

זה יכול להיות ירוק מלכיט (0.5%) או צבע מתילן כחול (0.3%) במשך 1 או 2 דקות, תוך שימוש זמן רב אם המרקם הוא דק.

שטפו את הכתם

יש להשתמש במים נקיים (מזוקקים).

מסננים

החלק האחורי של השקופית יש לנקות את הכתם צריך להיות ממוקם על מדף ניקוז, כך יבש האוויר (לא להשתמש נייר סופג לייבוש).

בחן את כתם במיקרוסקופ

מטרת 100X ואת שמן טבילה צריך לשמש. סרוק את הכתם באופן שיטתי ורשום את התצפיות הרלוונטיות.

לפרש את התוצאות

תיאורטית, מיקרואורגניזמים צבועים בצבע אדמדם נחשבים לחומציות חיוביות מהירות (AAR +).

להיפך, אם המיקרואורגניזמים מוכתמים כחול או ירוק, בהתאם לצבע המשמש כצבע נגד, הם נחשבים חומצה שלילית אלכוהול עמיד (AAR-).

הפניות

1. Apurba, S. & Sandhya, B. (2016). יסודות של מיקרוביולוגיה מעשית (מהדורה ראשונה). האחים ג 'ייפי.
2. באומן, ר '(2014). מיקרוביולוגיה עם מחלות לפי מערכת הגוף (מהדורה 4). Pearson חינוך, Inc.
3. מורשת, ג 'יי, אוונס, א' & Killington, A. (1996). מיקרוביולוגיה מבוא (מהדורה ראשונה). הוצאת אוניברסיטת קיימברידג '.
4. Morello, J., Granato, P. Wilson, M. & Morton, V. (2006). מדריך מעבדה ו חוברת ב מיקרוביולוגיה: יישומים לטיפול בחולה (מהדורה 11). חינוך מקגרו-היל.
5. Vasanthakumari, R. (2007). ספר לימוד של מיקרוביולוגיה (מהדורה ראשונה). B.I. פרסומים PVT.