רייט של כתם יסוד, חומרים, טכניקה ושימושים

ה כתם של וריגט היא טכניקה צביעה שנוצרה על ידי הפתולוג האמריקאי ג 'יימס הומר רייט בשנת 1902, מן הכתם של Romanowsky. כמו הכתם של רומנובסקי היה יציב, ריגט שילב מתנול כמו ממס ו מקבע.

הגוון הזה הוא צבעוני, כלומר מייצר צבעים שונים בהתאם למבנה אשר סופג את הצבע. טכניקה מכתימה זו נמצאת בשימוש נרחב עבור ספירת תאי דם לבני הפרש וללמוד את המורפולוגיה של תאים אדומים, הטסיות לויקוציטים בדם היקפי ו מח עצם.

היישום שלה הוא מאוד חשוב, שכן חריגות ניתן לראות את שורות תאים שונים של הדם, להקל על אבחון של מחלות כגון לוקמיה או זיהומים חיידקיים או טפיליים.

אולי אלה היישומים הנפוצים ביותר שבו טכניקה זו משמשת, אולם הם לא היחידים. זה גם שימושי בדגימות אחרות מאשר דם מוח עצם, כגון דגימות של פריקה באף, ריר צואה, כיח, העור, בין היתר..

אינדקס

• 1 כתם של קרן רייט
• חומרים
  • 2.1 הכנה
  • 2.2 מאגר מאגר שנאגרו
  • 2.3 חומרים נוספים הדרושים לביצוע הצביעה
• 3 מרכיבי הכתם של רייט
  • 3.1 מתנול
  • 3.2 בולם זעזועים
  • 3.3 Eosin (Y)
  • 3.4 מתילן כחול
• 4 טכניקה
• 5 השירות
  • 5.1 המטולוגיה
  • 5.2 הפרשת האף
  • 5.3 פרזיטולוגיה
  • 5.4 זיהומים נשימתיים
  • 5.5 בקטריולוגיה
  • 5.6 מיקולוגיה
• 6 כיצד נראים המבנים של דגימת הדם עם הכתם של רייט??
• 7 המלצות עבור מכתים טוב
• 8 טעויות נפוצות צביעה Wrigth
  • 8.1 כתמים בהירים מאוד
  • 8.2 משקעים של הצבע
  • 8.3 להריח עם צבע אדמדם או כחול מאוד
• 9 מצב אחסון
• 10 הפניות

בסיס הכתם של רייט

כתם רייט נולד מכתים Romanowsky, מורכב פתרון של אלכוהול מתיל צבען חומצה (Eosin Y) ואחד בסיסית (כחול מתילן) ומוצרי החמצון שלהם.

תערובת הצבע המשמשת כתם רייט יש השפעה המכונית Romanowsky, כלומר מספק גוון סגול יפה הגרעינים של לויקוציטים גרגרי neutrophilic, בעוד תאי דם אדומים הם ורודים צבעוניים.

הרכיבים האחראים למתן המגוון הטיפוסי של צבעים כתמים רייט הם B הכחול eosin י ההשפעה שנצפתה תלוי עקדת צבעים למבנים הכימיים והאינטראקציות של B הכחול Eosin Y.

מבנים חומציים כגון חומצות גרעין, חלבונים גרעיניים ציטופלסמה בוגרת של כמה סוגי תאים, לתקן את B כחול (צבע בסיסי).

בעוד המבנים הבסיסיים כגון המוגלובין, הגרגירים של eosinophils מקוטע, בין מבנים סלולריים אחרים, לתקן את yosin Y (חומצה צבע).

התוצאה של מכתים יכול להיות מושפע מגורמים שונים, כגון ה- pH של צבע רייט, חיץ פתרון לשטוף; כמו גם את מכתים זמן תיקון.

לכן, כל צעד בהכנת ריאגנטים הוא קריטי חייב להיעשות מטפל בכל פרט.

חומרים

רייט צביעה. עבור 100 מ"ל נדרש:

לשקול 0.3 גרם של צבע רייט, למדוד 97 מ"ל של מתנול ו 3 מ"ל של גליצרול.

הכנה

ב מרגמה, במקום כמות כבדה של צבע רייט לאט להוסיף את גליצרול עד אבקת הוא מומס לחלוטין..

ואז מתנול הוא הוסיף, מעורבב ומזג לתוך בקבוק ענבר.

לפני השימוש הפתרון צריך להיות מזועזע עם תנועות עדינות ומסנן.

מאגר שנאגרו

בליטר של מים מזוקקים, 3.76 גרם של hydrophosphate דיודיום (Na₂HPO₄   2H₂0) בתוספת 2.1 גרם של אשלגן דיהידרוגן פוספט (KH)₂PO₄).

מערבבים היטב עד שכל ריאגנטים משולבים הם מומס. כוונן את ה- pH ל- 7.2. יוצקים לתוך צנצנת זכוכית ולשמור על טמפרטורת החדר.

חומרים נוספים הדרושים לביצוע הצביעה

גיליונות מזנקים או coverglass, pisetas צביעת גשר עם מים או חיץ לשטיפה, טיימר לשאת את הזמנים המכתימים חומר יבוש: חומרים אחרים בנוסף לביצוע טכניקה מכתימה, אלה נדרשים (נייר סופג, גזה או צמר גפן).

רייט רכיבים כתם

מתנול

אלכוהול (מתנול) משמש מקבע של כתם הדם לשקופית.

בעיקרון הוא מגיב צמצום, dehydrator ו מקבע coagulant. לכן, תפקידו הוא להקריש את החלבונים ולעשות אותם מסיסים, אבל בלי לקבל להכחיש אותם.

מתנול הוא מגיב הנפוץ ביותר לתקן כתמים בכל המעבדות, שכן הוא מספק תוצאות טובות יותר מאלה שהושגו עם אתנול. הריכוז האידיאלי הוא 99%.

בולם ההלם

המאגר (פתרון שנאגרו) יש את הפונקציה של התאמת או שמירה על ה- pH של צבע, שכן pH מותאם 7.2 הוא חיוני עבור מבני התא לקלוט צבעים כראוי.

מצד שני, את המעבר של קיבוע מתנול מייבש את התאים המאגר מסייע rehydrate אותם.

אאוסין (י)

Eosin יש זיקה עבור רכיבים בסיסיים כי זה צבע חומצה. שני סוגים של eosin דומים מאוד זה לזה, ולכן אחד משני יכול לשמש, להשיג את אותה תוצאה.

אחת נקראת eosin Y, eosin B eosin צהוב או Tetrabromo ואחרות, B erythrosine או dibromodinitrofluoresceína כחול. עם זאת, eosin Y משמש לעתים תכופות יותר.

המאפיין החשוב ביותר של צבע זה הוא קוטביות שלילית, זה עושה את זה נמשך על ידי מבנים סלולריים עם חיוב חיובי.

מתילן כחול

זהו צבע בסיסי. המאפיין העיקרי שלה הוא metachromasia, כלומר, לא כל המבנים הולכים להיות צבוע באותו צבע, זה תלוי בהרכב הכימי של המבנים כי הוא צביעה.

חלקם יהפכו אור כחול כהה ואחרים סגול כהה או לילך חיוור.

טכניקה

1 - לבצע את התפשטות המדגם כך סרט דק נשאר, או על שקופית או coverslip.

2 - תן אוויר יבש במשך כשעתיים.

3 - מניחים את הכתם היבש על גשר מכתים או מגש מכתים עם המדגם התפשט כלפי מעלה.

4-לכסות את הסדין עם טיפת צבע רייט טיפה עד שהוא מכסה את כל השטח. השאירו במשך 5 - 8 דקות.

5 - צבע צריך לכסות לחלוטין את השקופית, מבלי לשפוך מעל הקצוות. אם במהלך הזמן צביעה זה מתחיל להתאדות, טיפות נוספות צריך להיות ממוקם.

6-לאחר מכן להוסיף כמות שווה של בולם זעזועים, מכה קצת עד ברק מתכתי אופייני מופיע. קח 10 עד 15 דקות.

7. לשטוף עם מי ברז, הנחת סילון רך עד הסדין נראה ורוד.

8 - עם גזה ספוג באלכוהול להסיר את הצבע המצורפת לחלק האחורי של השקופית.

9 - אפשר למרוח להתייבש היטב לפני הצבת שמן טבילה לדמיין אותו במיקרוסקופ.

השירות

המטולוגיה

היא אידיאלית למריחת כתמי דם היקפיים, לבדיקת מרחקי דם עבים וללמידה של תאים מדגימות מוח עצם.

בשל התכונות הכימיות של שילוב זה של צבעים המבנים הסלולר ניתן לזהות בקלות, להיות מסוגל להבחין בין סוגים שונים של תאים הנוכחי.

הפרשת האף

טכניקה זו שימושית מאוד לזהות את התאים של הפרשת האף (תאים אפיתל, eosinophils מקוטע, polymorphonuclear) באבחון של נזלת אלרגית.

פרזיטולוגיה

במובן זה, זה היה שימושי עבור המחקר של לישמניה בתוך histiocytes של רקמה תת עורית של כיבים בעור. כמו כן, הוא משמש לזיהוי leukocytes בדגימות צואה (leucogram בצואה).

במקרה זה, זה מעניין את הרופא כדי לדעת אם לוקוציטוזיס הנוכחי בצואה הוא על ידי פולימורפונומי או מונונוקלרי. ממצא זה ב leucogram צואה ינחה אם זה זיהום חיידקי או ויראלי בהתאמה.

מצד שני, טפילים כי להסתובב בדם ניתן למצוא בתוך כדורית הדם או בחינם בפלסמה. הטפילים המבוקשים הם פלסמודיום, טריפנוסומה קרוזי ו filarias, וכן ברפואה וטרינרית הוא שימושי בחיפוש אחר Theileria equi ו Babesia Caballi, סוכנים סיבתיים של תינוקות, במיוחד בחיות.

רייט ו Giemsa הכתם יכול להבדיל hemoparasites מרכיבים סלולריים רגילים. לשם כך ניתן להשתמש בשני סוגים של ממרחים:

פיין מתיחה

הדם פרוש כמו סרט דק בשקופית. מוכתם בכתם רייט, חושף את המאפיינים של הגרעין והציטופלסמה.

טיפה עבה

מתודולוגיה זו משמשת לבדיקת נוכחותם של טפילים בכמות גדולה יותר של דם.

בשביל זה, טיפה גדולה של דם מונח על שקופית. ברגע שיש, אתה צריך defibrinate, מה שהופך עיגולים גדולים יותר ויותר מהמרכז החוצה, באמצעות קצה של שקופית אחרת.

לבסוף, כדי לבחון את הטפילים במריחה עבה, את אריתרוציטים חייב להיות lysed עם מים.

זיהומים בדרכי הנשימה

ברמה הנשימה טכניקה זו שימושית גם, כי התאים הנמצאים בדגימות כיח, הסימפונות או ברונכואלוואלה שטיפה, חשובים כדי לקבוע את האבחנה.

כמו כן, תאים פולימורפונומיים ותאי mononuclear ניתן להבחין כאן.

בקטריולוגיה

השימוש בטכניקה זו בבקטריולוגיה מוגבל, כי זה לא טוב מכתים את החיידקים, ולכן מכתים אותם טכניקות צביעה מיוחדים אחרים משמשים.

עם זאת, הוא שימש כדי לחפש תאים אפיתל עם גופים הכללה של כלמידיה טרכומטיס ב smars של השופכה או רירית endocervical, למרות שזה חייב להיות מוכר כי היא לא השיטה הטובה ביותר עבור זה.

אפשר גם לראות חיידקים מסוג ספירלה בין תאי הדם האדומים בורליה בורגדורפי בחולים נגועים, כמו גם morulae או הכללת גופים של Ehrlichia sp ב cytoplasm של לימפוציטים, מונוציטים או נויטרופילים במריחת דם.

מיקולוגיה

ה Histoplasma capsulatum הוא פטרייה פתוגנית מאובחנת לעתים קרובות על ידי תצפית מיקרוסקופית של דגימות רקמות שונות, מוכתם כתם של רייט.

איך נראים המבנים של דגימת הדם עם הכתם של רייט?

המלצות עבור מכתים טוב

הרחבות של דגימות דם צריך להיות יבש באוויר ספונטנית. מרחים צריך להיות דק ככל האפשר כדי להשיג קיבעון טוב יותר של צבע ולהימנע overcollorations.

לקבלת צביעה באיכות גבוהה, רצוי לבצע את מכתים במהלך שעתיים לאחר ההכנה של כתם. מצד שני, המדגם האידיאלי הוא דם נימי, ללא נוגדי קרישה.

עם זאת, אם דם ורידי משמש צריך לשמש EDTA נוגד קרישה וכן הפרין לא, מאז שהאחרון עלול לעוות מבנים הסלולר.

כדי למנוע הידרדרות של צבע מוכן מוכן צריך להיות מאוחסן במקומות יבשים.

במהלך תהליך הכביסה מומלץ להשתמש במים המותאמים ל- pH ניטרלי.

לבסוף, מומלץ לבדוק את שיטות צביעה המשמשים את המעבדה כל כך הרבה פעמים.

זה נעשה על ידי צביעה דוגמאות או דפוסים מורחבת, כבקרת איכות. צעד זה חשוב, כמו זה מבטיח כי מכתים הוא הכין כראוי את צביעת פעמים הם סטנדרטית.

אם גיליון התבנית הוא בצבע רע, אז יש בעיות שיש לפתור.

טעויות נפוצות צביעה Wrigth

כתם חיוור מאוד

כתמים חיוורים מאוד, בדרך כלל בשל זמן קצר מאוד של מכתים או לשטוף מוגזם מאוד. זה מתוקן על ידי הארכת זמן מגע עם צבע או על ידי הפחתת זמן הכביסה.

צבע משקעים

משטח צבע משקעים עשוי להיות מספר גורמים, אולם, הגורמים השכיחים ביותר הם: שימוש צבע לצבוע לא מסונן על גשרי צביעה אחיד, באמצעות סדינים מלוכלכים עם אבק או שומן, לעשות שטיפה טובה סיים את הכתמה.

להריח עם צבע אדמדם או כחול מאוד

המאגר אחראי על ה- pH של הצבע. צבעים עם pH מתחת המצוין (חומצה) תביא כתמים אדומים מאוד.

אם pH של צבע הוא מעל (אלקליין) כתם כחלחל מאוד יתקבל.

מצב אחסון

מגיב צריך להיות מאוחסן בטמפרטורת החדר.

הפניות

1. V. גוטיירז מחקר השוואתי בין השיטה מכתימה רייט אליסה בדיקה עבור האבחון של ehrlichiosis כלבים בעיר סן פדרו סולה, הונדורס. 2008. תזה לתואר כדי להגיש בקשה לתואר דוקטור וטרינרי. אוניברסיטת סן קרלוס דה גואטמלה.
2. לופז-Jácome L, הרננדז-Durán M, C קולין-קסטרו, Pena-אורטגה S, G Cerón-גונזלס, פ פרנקו-Cendejas צבעי יסוד במעבדה למיקרוביולוגיה. מחקר על מוגבלות. 2014; 3 (1): 10-18.
3. "הכתם של רייט". ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. מאי 18 2018, 12:05 UTC. 8 דצמבר 2018, 20:37
4. Calderón A, Cardona J, Vergara ao. תדירות Babesia spp. סוסים של montería, Córdoba (קולומביה). Rev. udcaactual divulg cient.  2013; 16 (2): 451-458.
5. פורבס ב ', סחם ד', וויספלד א '(2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. ארגנטינה Panamericana S.A העריכה.
6. Retamales E, Mazo V. בריאות הציבור המכון של ממשלת צ 'ילה. המלצות עבור מכתים דם מכתים לקריאת ספירת הדם.