כתם על ידי קרן גרינוואלד- Giemsa מאי, טכניקה ושימושים

ה כתם גראנוואלד-גימזה o Pappenheim היא טכניקה צביעה דיפרנציאלי המערבב את רימג 'י Giemsa ו מאי Grünwald. הוא משמש להבחנה של תאי דם נורמליים וחריגים בשלפוחיות של דם פריפריאלי ומוח עצם, וכן עבור מכתים של חלקים היסטולוגיים ודגימות ציטולוגיות.

שני ריאגנטים - Gemsa ומאי Grünwald - נגזרים מכתים Romanowsky סוג, טכניקה המבוססת על שילוב של חומצה צבעים בסיסיים.

Giemsa שיפרה את הטכניקה על ידי ייצוב תערובת של eosin, methylene כחול ונגזרותיו, עם גליצרול. לעומת זאת, מאי Grünwald משתמשת eosin ו methylene כחול, באמצעות מתנול כממס. שילוב אסטרטגי זה נתן תוצאות מצוינות.

בעוד מבחינת תצפית תא מורפולוגיה פועל בדומה Giemsa ו רייט, טכניקה זו משפרת את טפילי צביעת הכוונון מעל שגרם מלריה, שגאס leishmaniasis ו trichomoniasis.

בנוסף, היא הוכיחה להיות טכניקה שימושית מאוד עבור המחקר cytological של נוזל הזרע. זה כבר מודגש לא רק על ידי הצגת המאפיינים המורפולוגיים של הזרע, אלא גם מאפשר להבדיל עם יעילות גבוהה leukocytes, תאים אפיתל תאים של spermatogenesis.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 מגוון צבעים
• 2 טכניקה
  • 2.1 חומרים
  • 2.2 פתרון צבע מרוכז מאי Grünwald
  • 2.3 צבע ג 'מסה מרוכז
  • 2.4 הכנת תמיסת החיץ ב pH 7.2
  • 2.5 כתם דם או הליך של מח עצם
  • 2.6 טכניקת צביעה מורחבת של נוזל הזרע
  • 2.7 מפרטים חשובים
• 3 שימושים
  • 3.1 ציטולוגיה נרתיקית
  • 3.2 מדגם זרע
• 4 הפניות

קרן

הטכניקה עוקבת אחר יסודות הכתמים של רומנובסקי, שבהם צבעי החומצה הם בעלי זיקה סלקטיבית למרכיבי היסוד הסלולר והרכיבים החומציים מושכים את הצבעים הבסיסיים.

מוסבר בדרך אחרת, הן מבנים תאים צבעים יש חיובי חשמלי חיובי או שלילי; חיובים שווים להדוף חיובים שונים נמשכים.

לדוגמה, צבעים בסיסיים כגון מתילן כחול נטענים חיובי והם נמשכים על ידי מבנים טעונים שלילי. זו הסיבה גרעיני צבע זה גרעינים עשירים ב- DNA ו- RNA כי יש טעונה שלילית קבוצות פוספט.

הגרגירים של בזופילים מקוטעים cytoplasms של תאי הדם הלבנים mononuclear המכילים RNA מוכתמים גם.

כמו כן, הצבע וחומצת נושאת מטען שלילי, כך הוא נקשר מטען חשמלי חיובי כמו אריתרוציטים גרגרים של אאוזינופילים מפולחי מבנים. באשר גרגירים של נויטרופילים מקוטע, אלה לתקן את שני צבעים.

מגוון של צבעים

בטכניקה זו, שילוב של תגובות בין צבעים אורתוכרומטיים ומטארומטיקה מתקיימים יחד. Orthochromatics (eosin ו methylene כחול) לאגד את מבנה התא שבו הם קשורים ולספק צבע יציב שאינו משתנה.

במקום זאת, metachromatic (נגזרות של מתילן כחול תכלת א ב Azure), להשתנות צבעם המקורי כבול פעם למבנה מסוים, וייתכן אפילו יש מגוון של גוונים.

לבסוף, הצעד שננקט על ידי הפתרון Grünwald מאי דורש נוכחות של מים, כי בלעדיו צבע יחדור המבנים אבל לא יהיה קבוע. כדי שזה יקרה צבע צריך להיות הקוטב או מיונן, ובכך להיות מסוגל להאיץ לצרף מבנים קשורים.

טכניקה

חומרים

- שקופיות עבור שקופיות.

- צביעת גשרים.

- הפתרון של מאי- Grünwald.

- כתם ג'יאמסה.

- מים מזוקקים.

פתרון צבע מרוכז מאי Grünwald

אנחנו חייבים לשקול 0.25 גרם של eosin-methylene כחול (צבע על פי מאי Grünwald) ו להמיס 100 מ"ל של מתנול. תערובת אז מעורבב במשך שעה 1 והשאיר לנוח במשך 24 שעות. סיים את הזמן, הוא מסנן.

כדי ליישם את הטכניקה להיות מדולל צבע במאי גרונוולד כדלקמן: עבור 200 מ"ל של צבע מדולל 30 מ"ל של התמיסה המרוכזת נמדדים, 20 מ"ל של תמיסת חיץ מתווספים 150 מ"ל של מים מזוקקים מותאם pH7.2-7.3 . לאחר מכן הוא מעורבב ומסונן.

צבע ג'יימסה מרוכז

הם צריכים להישקל 0.5 גרם של מתילן כחול תכלת eosin (צֶבַע Giemsa), מומס 50 מ"ל של מתנול הצבת גליצרין תערובת 50 מ"ל.

כדי לבצע את הטכניקה, לדלל 1:10 עם פתרון חיץ ולתת לו לנוח במשך 10 דקות. זה יכול להיות מסונן במידת הצורך.

הכנת הפתרון חיץ ב pH 7.2

יש לשקול אותם:

- 40 מ"ג של אשלגן די מימן פוספט (KH2PO4).

- 151 מ"ג די סודיום מימן פוספט 12-hydrate (Na2HPO4).

שני התרכובות נמסים 100 מ"ל של מים.

כתם דם או הליך מכתים של מח עצם

ישנן שתי דרכים: קלאסי מהיר.

מצב קלאסי

1. מכסים את המריחות במשך 2 או 3 דקות עם פתרון מאי מדולל Grünwald.
2. לשטוף עם מים מזוקקים שנאגרו כדי לחסל את הפתרון הקודם.
3. מכסים עם פתרון לשטוף אותו להיפרד ולהשאיר למשך 1 דקה. הרעיון הוא כי הצבע הקודם הוא קבוע למבנים וכי, באותו זמן, התאים הם hydrated.
4. הוסף 12 טיפות של תמיסת Giemsa בדילול על המים שנאגרו מכה לערבב homogenize. תן לעמוד במשך 15 או 20 דקות.
5. שטפו את המריחות עם מים מזוקקים שנאגרו והכניסו אותו לאוויר יבש.
6. דגש ולהתבונן מיקרוסקופ אופטי תאי הדם מוכתמים באמצעות המטרה 40X. אם יש צורך, 100X ניתן להשתמש.

מצב מהיר

1. מכסים את כתם עם מאי Grünwald לצבוע בדילול במשך 1 דקה.
2. לשטוף עם מים מזוקקים שנאגרו.
3. מכסים עם מים שנאגרו ולתת לעמוד למשך 1 דקה.
4. מניחים את צבע Giemsa בדילול ולהשאיר במשך 5 דקות.
5. לשטוף עם מים מזוקקים שנאגרו ולאפשר לאוויר יבש.

הטכניקות המתוארות כאן הן מדריך מנחה, אך יש לקחת בחשבון כי נהלים וזמנים צביעה להשתנות בהתאם לבית המסחרי המספק ריאגנטים. מומלץ לעקוב אחר הצעדים המפורטים בקפידה על ידי כל בית מסחרי.

נוזל הזרע המורחבת צביעה טכניקה

1 - מכסים את התפשטות עם שכבה דקה של פתרון מאי Grünwald במשך 4 דקות.

2. הסר את הצבע ולשטוף עם מים מזוקקים.

3. מניחים שכבה של Giemsa בדילול (1:10) במים מזוקקים במשך 15 דקות.

4. הסר את צבע ולשטוף עם מים מזוקקים.

5. תנו להתייבש ולצפות תחת המיקרוסקופ.

מפרטים חשובים

הטכניקה דורשת כי ריאגנטים ופתרונות כביסה יש pH מותאם 7.2-7.3, כך הזיקה של צבעים עבור מבנים התא לא לעוות ולא לשנות את הצבע הסופי הצפוי.

שימושים

טכניקה זו משמשת מעבדות קליניות מכתים כתם של דם היקפי מוח העצם, קטעי רקמה cytologies.

בתחום ההמטולוגי, טכניקה זו היא בעלת חשיבות מכרעת בחקר הפרעות של תאים במונחים של צורה, גודל ומספר. זהו כלי בעל ערך רב לאבחון מחלות מסוימות, כגון לוקמיה ואנמיה.

בנוסף, הוא מציג כלי עזר מצטיינים כאשר מחפשים טפילים בשדות המטולוגיים (פלסמודיום ו טריפנוסומה קרוזי) או היסטולוגית (לישמניאס).

ציטולוגיה נרתיקית

לגבי ציטולוגיה הנרתיק, טכניקה זו היא יתרון במיוחד עבור תצפית טריכומונס וגינליס. זהו ממצא חשוב, שכן נוכחותו מדמה תמונות קרצינומה באתרם אשר לאחר מכן נעלמים כאשר הטפיל הוא חיסל.

דוגמת הזרע

זה כבר כלי אידיאלי לחקר דגימות הזרע, שכן הוא מספק מידע בעל ערך על איכות הזרע.

הנתונים שהוא מציע צריך לעשות בעיקר עם מספר מורפולוגיה, כמו גם עם תאים במקביל שיכולים להיות נוכחים, כי הם בעלי חשיבות חיונית, כגון תאי נבט, לויקוציטים ותאי אפיתל.

בעזרת ניתוח זה ניתן לתאר חריגות שנצפו בזרע בראש, הצוואר, החלק האמצעי והפיסה העיקרית.

בנוסף, הם יכולים גם לעזור להראות מקרים של hemospermia (נוכחות של כדוריות דם אדומות בזרע) ו leucospermia או pyospermmia (עלייה במספר leukocytes ב הזרע).

הפניות

1. Costamagna S, Prado מ אימות של המבחן הטרי, מאי Grünwald-Giemsa וגראם צבעים ותרבות התקשורת לאבחון של טריכומונס וגינליס. פרסיטול. 2001; 25 (1-2): 60-64. זמין ב: scielo.
2. המעבדה Merck KGaA. מאי Grünwald eosin מתילן כחול עבור מיקרוסקופיה.
3. "כתם מאי-גרינוולד-ג'מסה". ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. 15 נובמבר 2018, 14:37 UTC. 8 ינואר 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. זכוכית מעבדה כימיקלים Panreac. ריאגנטים לטכניקות היסטולוגיות, המטולוגיה ומיקרוביולוגיה. זמין ב: glasschemicals.com
5. Retamales E, מנזו V. המלצה על מכתים דם מכתים לקריאת ספירת הדם. מעבדה ביו-רפואית לאומית. המכון לבריאות הציבור של צ 'ילה.
6. Sarabia ל Spermiogram על פי הקריטריונים של ארגון הבריאות העולמי. תוכנית אנטומיה וביולוגיה של התפתחות. הפקולטה לרפואה אוניברסיטת צ'ילה זמין בכתובת: pp.centramerica.com