Kinyoun מכתים יסוד וטכניקות

ה מכתים קניון זוהי טכניקה צביעה המשמשים כתם חומצה מהר חיידקים טפילים חומצה. הוא נולד מתוך שינוי הצביעה של זיהל-נילסן; הן הטכניקות מתפרשות באופן זהה אך נבדלות שני אלמנטים: הכנת מגיב קרן הטכניקה אינה משתמשת בחום Kinyoun.

מסיבה זו היא ידועה גם קר שונה Ziehl-Neelsen או מכתים קניון קרים. זה מצוין עבור צביעה של שחפת Mycobacterium, Mycobacterium leprae, מיקובקטריה לא טיפוסית, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris ו Cyclosporas cayetanensis.

ראוי להזכיר כי Nocardias הכתם חלש עם טכניקה זו שכן הם אלכוהול עמיד חומצה חלקית, ולכן עבור הז 'אנר הזה יש שינוי של המתודולוגיה.

בתורו, טכניקה קניון קר היה בשילוב עם טכניקה trichrome שונה על ידי דידייה לאיתור coccidia (Cryptosporidium parvum ה Isospora Belli) ו נבגים של microsporidia (אנטרוציטוזון ביאנאסי ו אנצפליטוזון מעיים).

אינדקס

• 1 קרן
• 2 טכניקה
  • 2.1 חומרים
  • 2.2 הכנת פוקסין מקנין
  • 2.3 הכנת חומצת אלכוהול
  • 2.4 הכנת צבע מתילן כחול בניגוד
  • 2.5 טכניקה כתם קניון
  • 2.6 טכניקה מיוחדת של Kinyoun עבור Nocardias
  • 2.7 טכניקה משולבת של פוקסין פנוליים ו trichromic שונה על ידי דידייה
  • 2.8 בקרת איכות
• 3 טכניקת קניון לעומת טכניקת זיהל - נילסן
• 4 הפניה

קרן

המגיב העיקרי הוא מכתים carbolfuchsin או fuchsin, אשר המאפיין של מחייב חומצות קרבולי קיימות בתוך שומני דונגי תא קיר עשירים (חומצות mycolic) של Mycobacteria וטפילים מסוימים.

איחוד זה אינו מנוגד על ידי חומצה decolorizing; לכן, מיקרואורגניזמים מוגדרים אלכוהול עמיד חומצה.

שלא כמו הטכניקה Ziehl-Neelsen - אשר מתקן את הצבע דרך החום - בטכניקה Kinyoun שלב זה אינו הכרחי, שכן הפתרון פוקסין פנול שהוכן עבור טכניקה זו מכילה ריכוז גבוה של פנול..

פנול ממיס את החומר השומני של קיר התא, המאפשר את הכניסה של צבע פוקסין קרבול. לאחר צבע חודר, הוא נשאר קבוע למרות שטיפה עם חומצה אלכוהול.

בדרך זו, מיקרואורגניזמים עמידים חומצה ללבוש את הצבע האדום האופייני, בעוד כל מה שאינו אלכוהול עמיד חומצה הופך דהוי בצבע כחול..

טכניקה

חומרים

- השתנה fuchsin פנוליים.

- חומצת אלכוהול.

- מתילן כחול.

הכנת Kuchoun fuchsin fenicated

- פוקסין בסיסי: 4 גרם.

- פנול: 8 מ"ל.

- אלכוהול (95%): 20 מ"ל.

- מים מזוקקים: 100 מ"ל.

פוקסין בסיסי באלכוהול חייב להיות מומס לאט, ערבוב מתמיד. לאחר מכן, פנול התגבש הוא נמס באמבט מים ב 56 ° C. לאחר מומס, להוסיף 8 מ"ל לפתרון fuchsin מוכן מעל.

הכנת חומצת אלכוהול

- חומצה הידרוכלורית מתרכזת: 3 מ"ל.

- אתנול (95%): 97 מ"ל.

זה חייב להיות נמדד, הצטרף ומעורב.

הכנת צבע מתילן כחול בניגוד

- מתילן כחול: 0.3 גרם.

- מים מזוקקים: 100 מ"ל.

הוא שקל ונמוג.

טכניקת הכתם של קניון

1 - הכנת כתם ישירות מן המדגם, אשר יכול להיות כיח, נוזל ריאתי, משקע שתן, נוזל מוחי או צואה, בין היתר; או מתוך ההשעיה של מיקרואורגניזמים המתקבלים מושבות טהורות שפותחו בתקשורת התרבות הראשית.

2 - לתקן את כתם עם חום.

3 - מניחים את הכתם על גשר צביעה לכסות עם מגיב פוקסין פנולי של Kinyoun מוכן. תן לו לשבת במשך 3 או 5 דקות.

4. לשטוף עם מים מזוקקים.

5. Bleach עם אלכוהול חומצה במשך 3 דקות לשטוף שוב עם מים מזוקקים.

6. Bleach שוב עם אלכוהול חומצה במשך 1 או 2 דקות עד לא יותר צבע נגרר.

7. לשטוף עם מים מזוקקים ולתת ניקוז, הצבת השקופית במצב זקוף.

8. מכסים את ההכנה עם מתילן כחול ולהשאיר למשך 4 דקות.

9 - שטפו במים מזוקקים והניחו לאוויר להתייבש.

10 - לבחון ב 40X ולאחר מכן ב 100X.

אם אתה רוצה לשפר ולהאיץ את הכתמה של מיקרואורגניזמים מהר חומצה, להוסיף 1 טיפה של סוכן הרטבה (כגון טרגיטול מס '7) ל 30 או 40 מ"ל של פוקסין פנולי של Kinyoun..

כמה מעבדות לשנות צבע מתילן כחול בניגוד ירוק בהיר או חומצה picric; הראשון נותן צבע ירוק על הרקע והשני מייצר צבע צהוב.

Kinyoun טכניקה מיוחדת עבור Nocardias

כדי לשפר את מכתים של חיידקים Nocardia, שינוי של מכתים Kinyoun משמש. הטכניקה היא כדלקמן:

1 - מכסים את כתם עם פוקסין Kinyoun fensated במשך 3 דקות.

2. לשטוף עם מים מזוקקים.

3 - אקונומיקה קצרה עם אלכוהול חומצה מוכן 3% עד לא יותר צבע הוא entrained.

4. לשטוף שוב עם מים מזוקקים.

5. מכסים את ההכנה עם מתילן כחול ולהשאיר למשך 30 שניות.

6. לשטוף עם מים מזוקקים ולתת אוויר יבש.

טכניקה משולבת של פנצ'ין פנולי ו trichromic שונה על ידי דידייה

טכניקה זו מומלצת לניתוח דגימות צואה בחיפוש אחר coccidia ו נבגים של Microsporidium sp באותו זמן ההליך שיש לעקוב אחריו הוא כדלקמן:

1 - לכסות את המריחה עם פוקסין Kinyoun פנולי במשך 10 דקות.

2. הסר את הצבע ולשטוף עם מים מזוקקים.

3. Bleach במשך 30 שניות עם חומצה הידרוכלורית אלכוהול.

4. לשטוף שוב עם מים מזוקקים.

5. לכסות את המריחה עם פתרון trichrome במשך 30 דקות על 37 מעלות צלזיוס.

6. לשטוף עם מים מזוקקים.

7- Decolorize במשך 10 שניות עם חומצה אצטית אלכוהול.

8 - לשטוף את המריחה במשך 30 שניות באמצעות אתנול 95%.

בקרת איכות

כמו שליטה חיובית, כתמי מוכנים עם זנים של שחפת Mycobacterium ומוכתמים עם ריאגנטים מוכן כדי לוודא כי החיידקים לקחת את הצבע הנכון (אדום פוקסיה).

בקרות שליליות יכול לשמש גם על ידי הכנת מריחות עם כל זן כי הוא לא עמיד חומצה אלכוהול, ובכך לוודא כי המדגם כולו לוקח את הצבע של ניגודיות.

טכניקת קניון לעומת טכניקת זיהל - נילסן

הטכניקה Kinyoun הוא פשוט יותר, כי זה מבטל את הצעד של חימום, אבל היתרון העיקרי שלה הוא שזה מונע פליטה של ​​אדי, רעיל מאוד גורם לסרטן בטווח הארוך. לכן, מכתים Kinyoun הוא בטוח יותר עבור אנשי מכתים.

חשוב לקחת בחשבון כי יש צורך לדאוג כי ריאגנטים לא באים במגע ישיר עם העור, שכן הם קורוזיביים אקונומיקה דליק.

לגבי החסרונות, כתם שלילי אינו מעיד בהכרח על כך שהמיקרואורגניזם אינו קיים. בנוסף, נוכחות של דטריית תאים יכולה לגרום לתופעות שווא, אשר יוצר בלבול באבחון.

הפניה

1. כימיה קלינית יישומית (2016). ערכת BK Kinyoun זמינה ב: cromakit.es
2. אורוצקו-ריקו מיגל. כתם קניון ושני קוקסידיה ב- HIV. כתב העת הרפואי MD. 2011; 3 (2): 137
3. פורבס ב ', סחם ד', וויספלד א '(2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. ארגנטינה Panamericana S.A העריכה.
4. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. (מהד 'ה -5). ארגנטינה, עריכה Panamericana S.A..
5. תורמים ויקיפדיה. "כתם קניון". ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית, 8 בפברואר 2018. אינטרנט. 5 ינואר 2019.
6. Combol A, פרננדז N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. יישום טכניקת צבע לאבחון סימולטני של Coccidia ו Microsporidia. המכון להיגיינה של אוניברסיטת הרפובליקה. מונטווידאו. אורוגוואי זמין ב: higiene.edu.uy