Giemsa מכתים יסוד, חומרים, טכניקה ושימושים

ה כתם ג'יאמסה הוא סוג של מכתים של דגימות קליניות, על בסיס תערובת של חומצה צבעים בסיסיים. יצירתו היתה בהשראת העבודה שנעשתה על ידי רומנובסקי, שם גוסטב Giemsa, כימאי ובקטריולוג במקור מגרמניה, לשכלל אותו על ידי הוספת גליצרול לייצב את המרכיבים.

השינויים שנוצרו בטכניקה המקורית של רומנובסקי אפשרו לשפר במידה ניכרת את התצפיות המיקרוסקופיות, ולכן הטכניקה הוטבלה עם השם של כתם ג'ימסה.

בגלל זה היא טכניקה פשוטה לבצע, פונקציונלי מאוד חסכוני, הוא נמצא בשימוש נרחב במעבדה הקלינית עבור smars hematological, דגימות מוח עצם וחלקי רקמות..

טכניקת מכתים Giemsa הוא מאוד שימושי עבור מחקרים ציטולוגיים, שכן הוא מאפשר תצפית של מבנים ספציפיים של תאים. טכניקה זו כתמים cytoplasms, גרעינים, nucleoli, vacuoles וגרגירים של התאים, להיות מסוגל להבחין אפילו עקבות בסדר של הכרומטין.

בנוסף, שינויים משמעותיים בגודל, הצורה או צבע של הגרעין ניתן לזהות, שבו ניתן לדמיין את אובדן הקשר גרעין ציטופלסמה.

מצד שני, הוא מאפשר לזהות תאים לא בוגרים במוח העצם ובדם ההיקפי, להיות חשוב לאבחון מחלות קשות כגון לוקמיה. אפשר גם לזהות hemoparasites, חיידקים נוספים תאיים, פטריות, בין היתר.

ב cytogenetics זה משמש למדי, שכן ניתן ללמוד את מיטוזה של תאים.

אינדקס

• 1 קרן של צבע Giemsa
• חומרים
  • 2.1 חומרים להכנת פתרון האם
  • 2.2 אופן ההכנה של פתרון האם
  • 2.3 חומרים להכנת הפתרון למאגר
  • 2.4 הכנה סופית של הצבע
  • 2.5 חומרים נוספים הדרושים לביצוע הצביעה
• 3 טכניקה
  • 3.1 תהליך מכתים
• כלי עזר
  • 4.1 המטולוגיה
  • 4.2 מיקולוגיה
  • 4.3 בקטריולוגיה
  • 4.4 פרזיטולוגיה
  • 4.5 ציטולוגיה
  • 4.6 ציטוגנטיקה
• 5 מחקר מדגים את היעילות של מכתים Giemsa
• 6 המלצות עבור מכתים טוב
• 7 טעויות נפוצות של צביעה של Giemsa
  • 7.1 צבע כחול מאוד
  • 7.2 צביעה ורודה מוגזמת
  • 7.3 נוכחות המשקעים במריחה
  • 7.4 נוכחות ממצאים מורפולוגיים
• 8 מצב אחסון
• 9 הפניות

הקרן של צבע Giemsa

צבעי רומנובסקי מבוססים על שימוש בניגוד בין חומצה לבין צבעים בסיסיים, כדי להשיג מכתים של מבנים בסיסיים וחומציות, בהתאמה. כפי שניתן לראות יש זיקה של צבעי חומצה לצבוע את המבנים הבסיסיים ולהיפך.

צבע בסיסי המשמש מתילן כחול ונגזרות חמצון שלה (Azure A ו Azure B), בעוד צבע חומצה הוא eosin.

מבני החומצה של התאים הם חומצות גרעין, גרגירים של basophils מפולח, בין היתר, ולכן הם יהיו צבוע עם מתילן כחול.

במובן זה, המבנים הבסיסיים של התאים הם המוגלובין וכמה גרגירים כמו אלה הכלולים eosinophils מפולח, בין היתר; אלה יהיה צבוע עם eosin.

מצד שני, בשל העובדה כי מתילן כחול תכלת מאופיינים צבעים metachromatic, הם יכולים לספק צליל משתנה המבנים השונים על פי עומס polanyions יש להם..

כך השילוב האסטרטגי של צבעים בסיסיים וחומציים מסוגל לפתח מגוון רחב של צבעים, על פי המאפיינים הביוכימיים של כל מבנה, הליכה בגוונים כחולים בהירים, כהים, לילך וסגול במקרה של מבנים חומציים.

בעוד צבע מסופק על ידי eosin יציב יותר, יצירת צבעים בין כתום אדמדם סלמון.

חומרים

חומרים להכנת פתרון האם

הכנת הפתרון המניה דורש במשקל 600 מ"ג של אבקת ג 'ימסה צבע, מדידת 500 סמ"ק של אלכוהול אצטון ללא מתיל ו 50 סמ"ק של גליצרין ניטרלי.

אופן ההכנה של פתרון האם

מניחים את אבקת הג'ימסה הכבדה במכתש. אם יש גושים, הם צריכים להיות מרוססים. לאחר מכן להוסיף כמות ניכרת של גליצרין נמדד ומערבבים היטב. תערובת המתקבל הוא שפך לתוך בקבוק ענבר נקי מאוד.

שאר הגליצרין ממוקם במלט. מערבבים שוב כדי לנקות את הצבע שנותר כי כבר תקוע על קירות המלט ושופכים לתוך אותו בקבוק.

הבקבוק מכוסה ונישא במשך שעתיים באמבט מים ב 55 מעלות צלזיוס. בזמן אמבטיה באמבטיה, לערבב קלות את התערובת כל חצי שעה בערך.

לאחר מכן, תערובת מותר מגניב למקום אלכוהול. בעבר, חלק אלכוהול נמדד ממוקם המלט כדי לסיים את מה שנשאר מן הצבע ולאחר מכן הוא הוסיף לתערובת יחד עם שאר אלכוהול.

הכנה זו אמורה להתבגר לפחות 2 שבועות. החלק שישמש את פתרון האם חייב להיות מסונן.

כדי למנוע זיהום של ההכנה, מומלץ להעביר את החלק כי יהיה שימוש קבוע בקבוק ענבר קטן עם טפטפת. הטעינה בכל פעם מגיב אוזל.

חומרים כדי להכין את הפתרון Buffer

מצד שני, פתרון חיץ ב pH 7.2 מוכן כדלקמן:

6.77 גרם של פוספט נתרן (נטול מים) הם שקלו (NaHPO₄), 2.59 גרם של פוספט אשלגן דיכאון (KH)₂PO₄) ומים מזוקקים עד 1000 סמ"ק.

הכנה סופית של הצבע

להכנת הפתרון הסופי מכתים, 2 סמ"ק של פתרון המניות מסוננים נמדדת ומעורבת עם 6 סמ"ק של הפתרון חיץ. התערובת מתעוררת.

עובדה רלוונטית שיש לקחת בחשבון, היא כי טכניקות הכנת צבע יכול להשתנות בהתאם לבית מסחרי.

חומרים נוספים הדרושים לביצוע הצביעה

מלבד החומרים המתוארים, זה צריך להיות מסופק עם גשרים צבע, מסכי מים או חיץ לשטיפה, סדינים עבור חפצים או מכסה, סטופר כדי לשלוט על צביעה פעמים נייר סופג או כמה חומר שניתן להשתמש בהם כדי לייבש ( גזה או כותנה).

טכניקה

תהליך מכתים

1) לפני צביעה, אתה חייב להיות התפשטות המדגם על שקופית נקייה..

הדגימות יכולות להיות דם, מוח עצם, חתכים של רקמות היסטולוגיות או דגימות צוואר הרחם. מומלץ כי outsides להיות רזה יש 1 או 2 שעות של ייבוש לפני צביעת אותם.

2) כל הסדינים יש לך צבע ממוקמים על גשר צבעוני. תמיד לעבוד באותו סדר ולזהות כל גיליון היטב.

3) מניחים כמה טיפות של 100% מתיל אלכוהול (מתנול) על המריחה ואת לעזוב למשך 3 עד 5 דקות, כדי לתקן לייבש את המדגם.

4) מחק את המתנול נוכח בגיליון ולאפשר להתייבש באוויר.

5) לאחר יבש, במקום הפתרון הסופי מכתים עם טפטפת עד הסדין כולו מכוסה. השאירו את המקום במשך 15 דקות. כמה מחברי ממליצים עד 25 דקות. תלוי בבית המסחרי.

6) מסננים את הצבע ולשטוף את כתם עם מים מזוקקים או עם פתרון חיץ 7.2.

7) על נייר סופג לתת סדינים להתייבש באוויר הפתוח, מסודרים אנכית בעזרת תמיכה.

8) לנגב את החלק האחורי של השקופית עם גזה או צמר גפן ספוג לחות עם אלכוהול כדי להסיר כל צבע שנותר.

כלי עזר

הטכניקה מכתים Giemsa משמש במספר תחומים, כולל: המטולוגיה, מיקולוגיה, בקטריולוגיה, פרזיטולוגיה, cytology ו cytogenetics.

המטולוגיה

זהו כלי השירות השכיח ביותר שניתן זה מכתים. עם זאת, אנו יכולים לזהות כל אחד מהתאים הנוכחי דגימות של מוח העצם או דם היקפי. כמו גם להעריך את מספר כל סדרה, להיות מסוגל לזהות ליקוציטוזיס או לוקופניה, טרומבוציטופניה, וכו '.

מכיוון שהוא רגיש לזהות תאים לא בוגרים, הוא רלוונטי באבחון של לוקמיה חריפה או כרונית. ניתן גם לאבחן אנמיה, כגון מחלת תאי מגל, מחלת תאי מגל, בין היתר..

מיקולוגיה

באזור זה הוא נפוץ להשתמש בו כדי לחפש Histoplasma capsulatum (פטריות dimorphic תאיים) בדגימות רקמות.

בקטריולוגיה

בכתמי דם מוכתמים בג'ימסה ניתן לזהות בורליאס בחולים עם המחלה הנקראת חום חוזר. Spirochetes הם בשפע בין אריתרוציטים, בדגימות נלקח בשיא פבריל.

כמו כן ניתן לדמיין חיידקים תאיים כמו Rickettsias sp ו כלמידיה טרכומטיס בתאים נגועים.

פרזיטולוגיה

בתחום הפרזיטולוגיה, מכתים Giemsa אפשרה אבחון של מחלות טפיליות כגון מלריה, מחלת Chagas ו lishmaniasis..

בשני הראשונים הטפילים פלסמודיום ו טריפנוסומה קרוזי בהתאמה הם יכולים להיות דמיינו דם היקפי של חולים נגועים, הם יכולים להימצא בשלבים שונים על פי השלב שבו המחלה היא.

כדי לשפר את החיפוש אחר טפילי דם, מומלץ להשתמש כתם Giemsa מעורבב עם צבע מאי-גרינוולד.

כמו כן, ניתן לאבחן לישמניאזיס עורית בעת הערכת דגימות של ביופסיות עור מוכתמות בג'מסה, שם נמצא הטפיל.

ציטולוגיה

מכתים Giemsa משמש גם למחקר cytological של דגימות endocervical, למרות שזה לא הטכניקה הנפוצה ביותר למטרה זו.

אבל במקרים של מחסור במשאבים ניתן להשתמש, בעל פונקציונליות דומה לזו המוצעת על ידי טכניקה Papanicolaou ובעלות נמוכה יותר. עם זאת, זה דורש מומחיות מצד הבוחן.

ציטוגנטיקה

תכונה רלוונטית של מכתים Giemsa היא היכולת שלה לאגד חזק לאזורים עשירים adenines דנ"א thymines. זה מאפשר לדנ"א להיות דמיינו במהלך מיטוזה של התאים, במצבים שונים של עיבוי.

מחקרים אלה נחוצים כדי לזהות סטיות כרומטיות כגון כפילויות, מחיקות או טרנסלוקציות של האזורים השונים של הכרומוזומים..

המחקר הוכיח את היעילות של מכתים Giemsa

Cannova et al (2016), לעומת 3 שיטות צביעה לאבחון של לישמניאזיס עורית.

לשם כך, הם השתמשו דגימות המתקבל חיית ניסיוני (Murocrisetus auratus) מנוסה בניסוי עם לישמניאס.

המחברים הראו כי מכתים Giemsa היה טוב יותר מאשר פאפ מארט ® ו מכתים Gaffney. לכן, הם חשבו כי כתם Giemsa הוא אידיאלי כדי לאבחן leishmaniasis עורית.

התוצאות המצוינות שהושגו על ידי המחברים הם בשל השילוב של צבעים שמרכיבים את התערובת של Giemsa מציגים את התנאים דרושים כדי ליצור ניגוד חיובי, המאפשרים מבני הבחנה ברורים amastigotes הוא תוך ו extracellularly.

טכניקות אחרות (פאפ מארט ® ו Gaffney) גם עשה את זה, אבל בצורה חלשה יותר ולכן קשה יותר לדמיין. זו הסיבה מדוע כתם Giemsa מומלץ לאבחון פרזיטולוגי של לישמניאזיס.

כמו כן, מחקר של Ramírez et al (1994), העריך את תוקפן של כתמי ג'מסה ולנדרום במריחות הלחמית לצורך זיהוי כלמידיה טרכומטיס.

המחברים קובעים שלגימסה ולדרום כתמים יש את אותה סגוליות, אבל ג'יימסה היתה רגישה יותר.

זה מסביר מדוע כרגע מכתים Giemsa הוא הנפוץ ביותר המשמשים לאבחון של זיהומים chlamydial, במיוחד אם יש מעט משאבים.

המלצות עבור מכתים טוב

ייבוש של הסדינים לא צריך להיות מואצת. את הזמן הזהירות יש לחכות לייבושו באוויר הפתוח. בערך 2 שעות.

צבע מיד לאחר 2 שעות לקבלת התוצאות הטובות ביותר.

כדי מריחות להיות קבוע ומוכתמת טוב המדגם חייב להיות מופץ על הסדין בצורה כזאת שכבה דקה ואחידה נשאר.

מדגם הדם המועדף הוא נימי, שכן המריחה מתבצעת ישירות טיפת הדם ולכן המדגם אין תוסף, אשר מעדיף תחזוקה של מבנים התא.

עם זאת, אם הדם הוורי משמש EDTA יש להשתמש נוגדי קרישה ולא הפרין, שכן האחרון בדרך כלל מעוות את התאים.

טעויות נפוצות של צביעה של Giemsa

בפועל של צביעה זו, טעויות יכול להיעשות. הם מעידים על שינויים פתאומיים בגוונים של המבנים.

צבע כחול מאוד

זה יכול להיות בגלל:

• כתמים עבים מאוד
• עולה על זמן מכתים
• מעט מדי כביסה.
• שימוש ריאגנטים הרבה מעל pH ניטרלי (בסיסי).

בתנאים אלה הצבעים של המבנים הבאים מעוותים, כך אריתרוציטים ולא-סלמון ורוד צבוע יהיו ירוקים, הגרגרים של אאוזינופילים כי צריך להיות מוכתם לבנים אדומות כחלחלות או אפור יהפכו וכן הלאה רצון סטייה בגוונים הרגילים.

צבע ורוד מוגזם

זה יכול להיות בגלל:

• זמן מכתים לא מספיק.
• כביסה ממושכת או מוגזמת.
• ייבוש רע.
• שימוש ריאגנטים חומצה מאוד.

במקרה זה בפרט, המבנים כי הם מוכתמים בכחול בדרך כלל לא יהיה כמעט גלוי, ואילו המבנים כי הם מוכתמים ורודים יהיה טונות מוגזמת מאוד.

דוגמה: אריתרוציטים ייקח אדום בהיר או צבע כתום חזק, הכרומטין הגרעיני ייראה ורוד חיוור את הגרגירים של eosinophils יהפוך אדום בוהק..

נוכחות של משקעים במריחה

הסיבות יכולות להיות:

• השתמש גיליונות מלוכלכים או שטף גרוע.
• אל תיתן למריחה להתייבש היטב.
• השאירו את הפתרון לתקן זמן רב מדי.
• כביסה לא מספקת בסוף הכתם.
• סינון לקוי או לא סינון של צבע כי הוא בשימוש.

נוכחות של חפצים מורפולוגיים

ממצאים מורפולוגיים עשויים להופיע במריחות, מה שמקשה על הדמיון והפרשנות של המבנים הקיימים. הסיבה לכך היא:

• סוג של נוגדי קרישה המשמשים, כגון הפרין.
• שימוש בסדינים מלוכלכים, פגומים או שמנוניים.

מצב אחסון

לאחר הכנת צבע צריך להישמר בטמפרטורת החדר (15 - 25 מעלות צלזיוס), כדי למנוע את צבע מ מזרז. זה חייב להיות מאוחסן בתוך מיכל ענבר סגור.

הפניות

1. Cannova D, Brito E and Simons M. הערכת טכניקות צבע לאבחון של לישמניאזיס עורית. סאלוס.  2016; 20 (2): 24-29.
2. ריאגנטים ITW. כתם ג'יאמסה. גרסה 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. קסטלר דל ואלס, ספרד.
3. Clark G. ההליכים מכתים (1981), 4thed. וויליאמס ווילקינס.
4. כימיה קלינית יישומית ג 'ימסה לצבוע לאבחון במבחנה. מפיץ: cromakit.es
5. רמירז R, מג'יה M, גרסיה דה לה ריבה J, F ו הרמס Grazioso ג תוקף Giemsa ו לנדרום ב מטליות הלחמית לזיהוי כלמידיה טרכומטיס. בול של סניט פנאם. 1994; 116 (3): 212-216.
6. קאסאס רינקון ג 'כללי מיקולוגיה. 1994. 2nd Ed. אוניברסיטת Universidad דה ונצואלה, מהדורות ספריה. ונצואלה, קראקס.
7. "כתם ג'ימסה". ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. 1 Sep 2017, 01:02 UTC. 6 דצמבר 2018, en.wikipedia.org.