בסיס Tetrathionate מרק, הכנה ושימושים

ה מרק טטרציה או TT הוא בינוני סלקטיבי תרבות נוזלי להעשרה והתאוששות של זני סלמונלה. הוא נוצר על ידי Müeller ולאחר מכן שונה על ידי קאופמן, ולכן יש מי שקוראים לזה מילר-קאופמן מרק.

המדיום המקורי מכיל peptones חלבונים, סידן פחמתי ונתרן thiosulfate. קאופמן הוסיף מלחי מרה ויצר שיטה אחרת עם ירוק בהיר. חומרים אלה לעכב את הצמיחה של קוליפורמים, עוזב את המדיום החופשי לפיתוח של חיידקים פתוגניים, במקרה זה סלמונלה.

השינוי היה מוצלח מאוד משום שהוא הגדיל באופן משמעותי את הרגישות של המדיום. לכן, זה כרגע שימושי עבור החיפוש של Salmonellas בכל סוג של מדגם, אבל במיוחד עבור מוצק או צואה נוזלי מזון..

הכנתו מורכבת משני שלבים; המדיום המסחרי הוא בסיס להכנת מרק tetrathionate, ולאחר מכן עבור tetrathionate להיווצר, פתרון יוד יוד להוסיף להשלמת המדיום.

האגודה האמריקנית לבריאות הציבור (APHA) ממליצה על שימוש במרק tethionate בתוספת ירוק בהיר להעשרת דגימות בחיפוש של סלמונלה, שכן הוא בררני יותר מרק מרק tetrathionate ואת מרק סלניט.

באופן כללי, המרק tetrathionate הוא אידיאלי כאשר חיידקים של סלמונלה סוג חשודים בכמויות קטנות או כי הם התעללו על ידי חשיפה לחומרים מעכבים או על ידי תהליכים תעשייתיים כי למזער את הכדאיות שלהם.

אינדקס

• 1 קרן
• 2 הכנה
  • 2.1 - טטרתיונאט
  • 2.2-Variante tetrathionate מרק עם ירוק בהיר
• 3 השתמש
• 4 בקרת איכות
• 5 המלצות
• 6 הפניות

קרן

פפטונים הנוכחי מתאים לקליין הלבלב digests ו עיכול פפטי של רקמה חיה. אלה מספקים את המקור של פחמן, חנקן וחומרים מזינים באופן כללי לצמיחה בקטריאלית.

מצידה, thiosulfate נתרן מגיב עם הפתרון iodinated כדי ליצור tetrathionate. זה מעכב את הצמיחה של coliforms וטוב לפתח את החיידקים המכילים את אנזים tetrathionate רדוקטאז, ביניהם הוא סוג סלמונלה, אבל גם פרוטאוס.

מלחים מרה משמשים גם כחומר מעכב של רוב החיידק החיידק החיובי וכמה חיידקים שליליים של גראם (קוליפורמים).

סידן קרבונט סופג את החומרים הרעילים שנוצר על ידי הפירוק של tetrathionate, אשר יוצר חומצה גופרתית. במובן זה, סידן פחמתי מנטרל את החומציות שמירה על ה- pH של המדיום יציב.

במקרה של המודלים הירוקים הבהירים, חומר זה מגביר את הכוח הסלקטיבי של המרק tetrathionate על ידי עיכוב מיקרואורגניזמים אחרים מלבד סוג סלמונלה..

הכנה

-Tetrationate מרק

תמיסת יוד יוד

לשקול:

• 6 גרם של יוד.
• 5 גרם של יודיד אשלגן.

יודיד אשלגן הוא מומס כ 5 מ"ל של מים מזוקקים סטריליים, ולאחר מכן יוד הוסיף מעט מעט בזמן התערובת מחומם. לאחר שהוא מומס לחלוטין הוא מלא מים מזוקקים סטריליים עד שהוא מגיע נפח סופי של 20 מ"ל.

חצי בסיס למרק tetrathionate

לשקול 46 גרם של המדיום מיובש להשעות 1 ליטר מים מזוקקים סטריליים. מערבבים וחום עד מומס לחלוטין, הוא יכול להרתיח רק כמה דקות. אין לעקר ב החיטוי. הבסיס של המדיום מותר להתקרר כ 45 ° C ובאותו זמן 20 מ"ל של הפתרון יודן הוסיף..

לאחר הוספת iodurada פתרון בינוני צריך לשמש באופן מיידי. אם אתה לא רוצה להשתמש בתערובת כולה, פעל כדלקמן:

10 מ"ל של המדיום הבסיס מופץ צינורות, ורק 0.2 מ"ל של הפתרון יודן הוא הוסיף לאלה להיות מחוסן עם דגימות..

אלה שאינם הולכים לשמש עדיין יכול להיות מאוחסן במקרר, עם זאת, כמו המדיום אינו מעוקרים, האידיאל הוא להכין את הכמות המדויקת הדרושה..

צבע המדיום לפני הוספת הפתרון יוד יוד הוא לבן חלבי עם משקע לבן ולאחר הוספת זה חום עם משקע צפוף. המשקע שנצפה הוא נורמלי ומתאים סידן פחמתי כי לא להתמוסס. ה- pH הסופי של המדיום הוא 8.4 ± 0.2.

-משתנה Tetrathionate מרק עם ירוק בהיר

כדי להכין את המרק tetrathionate עם ירוק בהיר כל השלבים המתוארים לעיל מבוצעות, אבל בנוסף, 10 מ"ל של פתרון ירוק בהיר מוכן ב 0.1% יתווספו לתערובת..

ירוק בהיר

פתרון זה ערוך כדלקמן:

לשקול 0.1 גרם של ירוק בהיר להשעות ב 100 מ"ל של מים מזוקקים. מחממים עד רותחים כדי להשיג פירוק מוחלט שלה. שמור בבקבוק ענבר.

השתמש

עבור דגימות צואה (תרבות הצואה) הפרוטוקול הוא כדלקמן:

לחסן 1 גרם של שרפרף מוצק או 1 מ"ל של צואה נוזלית בצינור עם 10 מ"ל של מרק tetrathionate מוכן לשימוש. לנער במרץ ו דגירה ב Aerobiosis ב 43 מעלות צלזיוס למשך 6-24 שעות.

לאחר מכן, לקחת aliquot של 10 μl 20 של מרק ו subculture אותו סלקטיבית בינוני סלמונלה, כגון אגר SS, אגר XLD, אגר ירוק בהיר, אקסטר hektoen אנטרית, בין היתר..

במקביל, התקשורת סלקטיבי עבור סלמונלה צריך להיות מחוסן עם מדגם ישיר (צואה) ללא העשרה. לקבלת דוגמאות של ספקטלים רקטלים, להוריד את החומר שנאסף בצינור ולהמשיך כמתואר לעיל.

עבור דגימות מזון לשקול 10 גרם של מזון מוצק או 10 מ"ל של מזון נוזלי לחסן בקבוק עם 100 מ"ל של מרק מוכן לשימוש tetrathionate. להמשיך באותה הדרך כפי שתואר לעיל אבל דגירה על 37 מעלות צלזיוס.

כפי שניתן לראות, היחסים בין המדגם לבין מרק תמיד יהיה 1:10.

בקרת איכות

על מנת לבדוק את המדיום תרבות, זנים שליטה ידוע ניתן להשתמש. הנפוצים ביותר הם ATCC זנים מאושרים.

זנים לשמש הם סלמונלה טיפימוריום ATCC 14028, סלמונלה DSM 4224, סלמונלה אנטריטידיס ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, אנטוקוקוס פקאליס ATCC 19433 סטפילוקוקוס אאורוס ATCC 25923.

עבור סלמונלה זנים פיתוח מעולה צפוי, בעוד Escherichia coli יכול להיות התפתחות חלשה או קבועה, זנים חיוביים Gram (Enterococcus ו Staphylococcus) הם מעוכבים חלקית או לחלוטין.

המלצות

-כמו המדיום הזה אינו מעכב את הצמיחה של Proteus, כמה מעבדות להשתמש 40 מ"ג / ליטר של novobiocin כדי למנוע את הפיתוח של זן זה חיידקי. את האנטיביוטיקה יש להוסיף לפני הפתרון יוד יוד.

-לאחר הכנת המדיום כולל הפתרון יוד יוד, זה לא צריך להיות יותר מ 2 שעות לאחר חיסון.

-ברגע של הפצת המדיום של צינורות, התערובת חייבת להיות homogenized ברציפות כדי resuspend המשקע נוצר.

-בדגימות פחות מזוהמות מרק tetrathionate מודגרת ב 35-37 מעלות צלזיוס, ובדגימות מזוהמים מאוד, הדגירה על 43 מעלות צלזיוס מומלץ..

הפניות

1. מעבדת קונדה פרונאדיסה. 2010. בסיס המרק tetrathionate על פי Müeller-Kauffmann. זמין ב:
2. מעבדות BD 2003. בסיס Tetrathionate בסיס. זמין ב:
3. מעבדות בריטניה. 2015. בסיס תתיונים בסיס. זמין ב:
4. מדיה BBL. 2005. ההכנות Tube לעיבוד מינים סלמונלה.
5. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
6. פלורס-Abuxapqui J, Puc-פרנקו M, ארדיה-Navarrete M, Living-רוזל M, פרנקו-Monsreal ג'יי השוואת התקשורת והתרבות נתרן סלניט ונתרן tetrathionate, וטופחו על שניהם 37 ° C ו- 42 ° C עבור בידוד סלמונלה של שרפרפי המוביל. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220