בסיס מרק יוריאה, הכנה ושימושים

ה מרק אוריאה הוא בינוני תרבות נוזלי, המשמש להדגים את נוכחותו של urease האנזים מיקרואורגניזמים מסוימים. Urease הוא אנזים מיקרוביאלי המופק באופן מכונן, כלומר, הוא מסונתז באופן עצמאי אם המצע שבו הוא פועל קיים או לא.

הפונקציה של urease קשורה פירוק של תרכובות אורגניות. לא כל מיקרואורגניזמים מסוגלים לסנתז את האנזים הזה, ולכן הנחישות שלו במעבדה מאפשרת זיהוי זנים חיידקיים מסוימים ואפילו הבחנה בין מינים של אותו סוג..

ישנם שני סוגים של בדיקת אוריאה: סטיוארט וכריסטנסן. הם שונים בהרכבם וברגישותם. הראשון הוא מיוחד כדי להראות כמות גדולה של urease המיוצר על ידי מינים של פרואוס סוג.

השני הוא יותר רגיש ויכול לזהות כמויות קטנות של באוראז שנוצר באיחור על ידי חיידקים אחרים, כגון Klebsiella, Enterobacter, סטפילוקוקוס, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, ו Mycobacterium סוגים הליקובקטר.

מרק אוריאה סטיוארט מורכב אוריאה, כלוריד נתרן, פוספט dipotassium, פוספט monopotassium, תמצית שמרים, מים אדומים פנול מזוקקים.

בעוד, מרק או אגר אוריאה של כריסטנסן מורכב peptone, נתרן כלורי, פוספט monopotassium, גלוקוז, אוריאה, פנול אדום, מים מזוקקים ו אגר. האחרון רק אם הוא בינוני מוצק.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 סטיוארט מרק אוריאה
  • 1.2 מרק כריסטנסן או אאור אגר
  • 1.3 פרשנות של שתי המדיה (Stuart and Christensen)
• 2 הכנה
  • 2.1 מרק אוריאה סטיוארט
  • 2.2 מרק כריסטנסן או אאור אגר
• 3 שימושים
• 4 זריעת בדיקת אוריאה
• 5 בקרת איכות
• 6 הפניות

קרן

אנזים urease הידרוליזה אוריאה כדי ליצור פחמן דו חמצני, מים ושתי מולקולות של אמוניה. תרכובות אלה מגיבות כדי ליצור את המוצר הסופי שנקרא פחמן אמוניום.

סטיוארט מרק אוריאה

סטיוארט מרק אוריאה הוא יותר שנאגרו עם pH של 6.8. לכן, מיקרואורגניזם חייב להיות מסוגל ליצור כמויות גדולות של אמוניום כדי להפוך אדום פנול. ה- pH חייב לעלות מעל 8.

לכן מרק אוריאה היא סלקטיבית עבור סטיוארט פרוטאוס, מניב תוצאות חיוביות תוך 24 עד 48 שעות של דגירה, והוא אינו יעיל עבור חיידקים המייצרים כמויות נמוכות של באוראז או hydrolyze לאט אוריאה.

הסיבה לכך היא מינים פרוטאוס מסוגלים להשתמש אוריאה כמקור חנקן. לעומת זאת, חיידקים אחרים המייצרים אוראזות זקוקים למקור נוסף.

עם זאת, Pérez et al. (2002) נקבע כי מרק אוריאה סטיוארט היתה יעילה כמו אגר אוריאה של כריסטנסן לקבוע באוראז ב זני שמרים של סוגים קנדידה, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon ו Saccharomyces.

מחברי המחקר טוענים כי השיגו 100% צירוף מקרים עם שני התקשורת (סטיוארט ו Christensen) על ידי דגירה של 24 ו - 48 שעות; מה שהופך את proviso כי הם לקחו כמו זנים חיוביים שהצליחו להפוך את התקשורת בצבע ורוד פוקסיה חזק.

הבהרה זו נחוצה, שכן לודדר (1970) אישר כי כמעט כל השמרים מצליחים למקם את הטבעת של אגר אוריאה של כריסטנסן ורוד בהיר. הסיבה לכך היא כי הם יכולים hydrolyze אוריאה בכמויות מינימליות, ועל היווצרות של אמינים על ידי decarboxylation חמצון של חומצות אמינו על פני השטח. זה לא צריך להתפרש חיובי.

שסתום או אגר אוריאה מ Christensen

כריסטנסן אוריאה מרק או אגר הוא פחות שנאגרו, להיות מסוגל לזהות כמויות קטנות של אמוניום. בנוסף, בינוני זה מועשר עם פפטונים גלוקוז. תרכובות אלה גורמות מיקרואורגניזמים אחרים המייצרים אוראזיס, אשר אינם גדלים במרק סטיוארט להתפתח.

כמו כן, מבחן קריסטנסן אוריאה מציע תוצאות מהירות יותר, במיוחד עבור פרוטאוס, להיות מסוגל לתת חיובי מאוד בתוך פחות מ -30 דקות כמו מינימום זמן עד 6 שעות כמו הזמן המקסימלי.

שאר מיקרואורגניזמים המייצרים באוראז להשיג בצבע חצי לפנייה קל לאחר 6 שעות, בתוקף ב 24, 48, 72 שעות או יותר, ואף זנים מסוימים עשויים לתת תגובות חלשות אחרי 5 או 6 ימים.

פרשנות של שני התקשורת (סטיוארט ו Christensen)

המדיום הוא במקור צהוב כתום בצבע תגובה חיובית יהפוך את הצבע של המדיום ורוד פוקסיה. עוצמת הצבע היא ביחס ישר לכמות של אמוניום המיוצר.

תגובה שלילית יעזוב את המדיום של הצבע המקורי למעט השמרים, אשר יכול לתת ורוד בהיר עם אגר כריסטנסן אוריאה.

הכנה

סטיוארט מרק אוריאה

לשקול את גרם גרם לפי האינדיקציות של הבית המסחרי. ממיסים במים מזוקקים סטרילי עדיף. אין להשתמש בחום כדי להתמוסס, כי אוריאה רגישה לחום.

שיטת סינון הממברנה משמשת לעיקור. לשם כך, מסנן Millipore עם נקבוביות של 0.45 μ בקוטר משמש. אל תשתמש החיטוי. לאחר פתרון מסונן, הוא מופץ צינורות סטריליים. כדי להשיג תוצאות אמינות, זה חייב להיות מועבר בין 1.5 מ"ל כמות מינימלית עד 3 מ"ל כמות מקסימלית לכל צינור..

אחסן במקרר ומזג לפני השימוש.

אם שיטת הסינון אינה זמינה, המדיום אמור לשמש באופן מיידי לקבלת תוצאות אמינות.

דרך נוספת להכין את מרק אוריאה סטיוארט היא כדלקמן:

כמה בתים מסחריים למכור את בסיס חצי למבחן אוריאה, לא כולל אוריאה.

הסכום הנקוב על ידי בית מסחרי הוא שקל. הוא מומס במים מזוקקים מעוקרים החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. תן לזה לנוח קצת וכאשר המדיום חם להוסיף 100 מ"ל של תמיסת אוריאה מוכן ב 20% ו סטריליזציה על ידי סינון.

הוא מופץ צינורות סטרילי, כפי שתואר לעיל.

שסתום או אגר אוריאה מ Christensen

-הכנת הפתרון אוריאה

שוקלים 29 גרם של אוריאה מיובש להמיס 100 מ"ל של מים מזוקקים. השתמש בשיטת הסינון כדי לעקר. לא החיטוי.

-בסיס אגר בסיס

ממיסים 24 גרם של אגר בסיס מיובש ב 950 מ"ל של מים מזוקקים. לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. בואו לעמוד עד שהוא מגיע לטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס ולהוסיף את אוריאה מוכן מראש aseptically.

יוצקים 4 עד 5 מ"ל לתוך צינורות סטרילי הטיה עד solidified. צריך להיות שיא חליל ארוך.

מדיום זה יכול גם להיות מוכן בצורה נוזלית.

שימושים

בדיקת אוריאה היא יעילה ביותר בהבחנה בין סוג פרוטיוס מגנריות אחרות של משפחת אנטרובקטריאצ'י, בהתחשב בתגובה המהירה שסיפק פרוטאוס.

אם נעשה שימוש בהרכב של כריסטנסן, הבדיקה מסייעת להבדיל בין מינים מאותו הסוג. לדוגמה, ס האמיוליטיקוס וס 'וורנריon סטפילוקוקוס coagulase שלילי betahemolytic, אבל הם שונים זה מזה ס האמיוליטיקוס זה אוריאה שלילית ס 'Warneri זה אוריאה חיובית.

מצד שני, מקנאלטי בהצלחה השתמשו 2% כריסטנסן אוריאה מרק ללמוד את הנוכחות של הליקובקטר פילורי בדגימות של ביופסיות שנלקחו רירית הקיבה (אזור antral).

הנוכחות של H. pylori זה מעיד עם בדיקת אוריאה חיובית. משך הזמן להתבונן בתוצאות הוא ביחס ישר לכמות המיקרואורגניזמים הקיימים.

כפי שניתן לראות, זוהי שיטה פשוטה לאבחון של הליקובקטר פילורי בביופסיות קיבה.

לבסוף, בדיקה זו שימושית גם כדי להבדיל מינים של ברוקלה הגנרית, Bordetella, Bacillus, Micrococcus ו Mycobacteria.

זורעים את בדיקת אוריאה

שתי השיטות דורשות inoculum מיקרוביאלית חזקה כדי לייעל את התוצאות. מושבות חיידקיים נלקחים עדיף אגר דם ושמרים אגר Sabouraud, עם כמה יוצאים מן הכלל. את inoculum הוא emulsified במדיום נוזלי.

עבור מרק אוריאה סטיוארט מודגרות על 37 מעלות צלזיוס למשך 24 עד 48 שעות, בידיעה כי אחד הוא רק מחפש זנים של פרואוס המין כאשר המתח הוא חיידק. עבור שמרים זה יכול להיות מודגרות על 37 מעלות צלזיוס או בטמפרטורת החדר למשך 24 עד 48 שעות של הדגירה.

במקרה של כריסטנסן מרק אוריאה, דגירה על 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. אם הבדיקה היא שלילית, זה יכול להיות מודגרות עד 6 ימים. אם הבדיקה חיובית לפני 6 שעות, זה מציין כי הוא זן של פרואוס סוג.

במקרה של אגר קריסטנסן אוריאה, את שפעת אגר הוא מחוסן מאוד, ללא ניקוב. מרק מודגרת ומפורשת באותו אופן.

בקרת איכות

זנים בקרה ניתן להשתמש כדי לבדוק את המדיום, כגון פרוטאוס מיראביליס ATCC 43071, דלקת ריאות קלבסילה  ATC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 ו סלמונלה טיפימוריום.  שני הראשונים חייבים לתת תוצאות חיוביות ואת שתי התוצאות השליליות האחרונות.

הפניות

1. פרז C, Goitía ק, מאטה S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. שימוש במרק אוריאה סטיוארט עבור בדיקת אוריאה, כמבחן באבחון של שמרים. L מפעל מיקרוביול. 2002; 22 (2): 136-140. זמין ב: Scielo.org.
2. Mac Faddin ג 'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית. עריכה פנמריקנה. בואנוס איירס ארגנטינה.
3. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
4. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
5. מעבדות בריטניה. כריסטנסן מדיו (בסיס אגר אורה) 2015. זמין ב: britanialab.com