בסיס מרק EC, הכנה ושימושים

ה מרק EC או מרק Escherichia coli זהו מדיום סלקטיבי של תרבות נוזלית. מדיום זה מומלץ על ידי שיטות תקן לספירת קוליפורמים צואתיים ו צואתיים, על ידי הטכניקה של המספר הסביר ביותר (NMP) בדגימות מים ומזון, שבו הסוכן העיקרי המעורב הוא Escherichia coli.

מרק EC מורכב טריפטין, לקטוז, מלחים מרה, פוספט dipotassium, פוספט monopotassium, נתרן כלורי ומים. הנוסחה שלה מתוכננת אסטרטגית לטובת הצמיחה של קוליפורמים צואתיים ו צואתיים ולמנוע התפתחות של מיקרואורגניזמים אחרים הנלווים.

החיידק Escherichia coli הוא קוליפורם צואה הראשי הנוכחי כמו זיהום מקורות מים ומזון, גרימת משפיעים על מערכת העיכול.

יש לציין כי ישנם סרוטיפים רבים של Escherchia coli; (EECEC), אנתרופוגני (ETEC) ו enteroaggregative (EAEC).

משמעות הדבר היא שיש את היכולת לאפשר את הפיתוח של כולם, אבל בלי להיות מסוגל להבדיל ביניהם. לשם כך, יש לבצע בדיקות נוספות.

המחקר המיקרוביולוגי של מים ומזון על ידי המספר הסביר ביותר (NMP) לחיפוש של קוליפורמים טוטליים וצבאי הוא פרוטוקול המתואם על ידי כמה שלבים; שלב משוער, שלב אישור ו השלמה שלב. מרק EC משמש בשלב אישור.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1
  • 1.2 מרק EC שונה עם novobiocin
• 2 הכנה
  • 2.1 מרק EC
  • 2.2 מרק EC שונה עם novobiocin
• 3 השתמש
  • 3.1 ניתוח קוליפורמים צואתיים ו צואתיים
• 4 בקרת איכות
• 5 המלצות
• 6 הפניות

קרן

EC EC

המדיום של EC מבוסס על מתן המרכיבים התזונתיים הדרושים להתפתחות אופטימלית של קוליפורמים טוטליים וצבואיים, בהם החיידק כלול Escherichia coli.

אלו רכיבים תזונתיים מסופקים על ידי טריפטין, להיות מקור מצוין של פפטידים וחומצות אמינו. בנוסף, הוא מכיל גם לקטוז, פחמימות תוססת המספקת אנרגיה ומאפשרת להראות אם החיידקים מייצרים גז.

מצד שני, המדיום מכיל מלחים מרה המספקים את אופי סלקטיבי, שכן היא מעכבת את הצמיחה של מיקרואורגניזמים חיוביים גראם שעשויים להיות נוכחים במדגם..

כמו כן, dipotassium פוספט ו monopotassium פוספט לפעול כאיזון מערכת pH. מערכת זו היא הכרחית, כי לקטוז הכלול במרק נוטה לחמצן את המדיום כאשר הוא מותסס על ידי מיקרואורגניזמים, אבל זה מתוגמל על ידי מלחי פוספט.

לכן, אלמנטים אלה הם חיוניים, כי החומצה uncontrolled יכול להשפיע על ההתפתחות הנכונה של מיקרואורגניזמים ביקשו.

מצדו, נתרן כלורי מייצב את המדיום אוסמוטי, בעוד מים הוא ממס של המומסים הנוכחי ומספק את העקביות נוזלי למדיום.

מרק EC שונה עם novobiocin

אוקראנד ורוז יצרו מגוון של מרק EC, שנקרא מרק EC שונה עם novobiocin. השינוי כלל את הפחתת הריכוז של מלחי מרה ואת תוספת של 20 מ"ג / ד"ל של novobiocin.

שינוי זה מעדיף התאוששות של זנים של Escherichia coli אנטרוהורורגי (O157: H7).

זה סרוטיפ חיידקי גורם קוליטיס hemorrhagic חמורה שיכולה לגרום hemolytic תסמונת uremic (HUS); אשר בתורו יכול לייצר אי ספיקת כליות חריפה, עם שיעור תמותה גבוה שיכול להגיע עד 50% אצל קשישים.

בשל תחלואה ותמותה הנגרמת על ידי חיידק זה מדי שנה בשל צריכת מזון מזוהם, מחלקת החקלאות של ארה"ב (USDA) ממליצה באופן נרחב על שימוש באמצעים אלה.

הכנה

EC EC

לשקול 37.4 gr של המדיום מיובש להתמוסס 1 ליטר מים מזוקקים. התערובת צריכה להישאר לנוח במשך 5 דקות. לאחר מכן, במקור חום, להמיס ממיסים לעתים קרובות.

לאחר מומס, הוא מופץ במבחנות מותנה בעבר עם צינור דורהאם בפנים. לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

ה- pH של המדיום צריך להיות 6.9 ± 0.2. צבע המדיום המיובש הוא בז 'ומוכן הוא ענבר בהיר.

היינות מאוחסנים במקרר עד שהם משמשים. בזמן השימוש המרקים חייבים להיות בטמפרטורת החדר.

מצד שני, מרק EC יכול גם להיות מוכן בריכוז כפול.

מרק EC שונה עם novobiocin

שוקל 36.7 גרם של המדיום מיובש להתמוסס 1 ליטר מים. שאר ההכנה זהה לזו שתוארה לעיל.

השתמש

ניתוח של קוליפורמים סך הכל צואתי

מרק EC הוא אידיאלי לשלב המאשר של המחקר של קוליפורמים בשיטת NMP, הן דגימות מים, כמו מוצרים פרמצבטיים ומזון.

עצבים עצלניים לייצור גז המרקים המתקבלים בשלב המשוער צריך להיות reseeded ב 2% בייל ירוק בהיר מרק EC.

עבור קוליפורמים הכולל המרקים EC מודגרת ב Aerobiosis עבור 24 עד 48 שעות ב 37 מעלות צלזיוס, ועל coliforms צואה הם מודגרת ב Aerobiosis עבור 24 עד 48 שעות ב 44 ° C.

בשני המקרים הוא מתפרש באופן הבא: צינורות עכורים עם ייצור גז נחשבים חיוביים. אם אין ייצור גז תוך 24 שעות, הדגירה נמשכת עד 48 שעות.

המרקמים החיוביים של EC עוברים לשלב המאשר המלא, המורכב מהזנה מחדש של חומרי הדפסה סלקטיביים, כגון אגר Mac Conkey, אגר EMB או אגר Endo..

אם המרק בשימוש הוא שונה EC עם novobiocin, צינורות חיוביים מומלץ reseed על אגר מק Conkey עם סורביטול.

בקרת איכות

בקרת איכות חייבת להתבצע על כל אצווה של המדיום מוכן. ראשית, את סטריליות של המדיום יש להעריך. במובן זה, אחד או שניים broths מודגרות ללא inoculating ב aerobiosis במשך 24 שעות ב 37 ° C. התוצאה הצפויה היא מרק שקוף, ללא עכירות או שינוי צבע.

שנית, יש להעריך את הצמיחה של זנים ידועים, בהם ניתן להשתמש בחיידקים הבאים: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, סלמונלה טיפימוריום ATCC 14028.

בכל המקרים צפויה התפתחות מיקרוביאלית משביעת רצון, תוך התבוננות במרק עכור עם ייצור גז E. coli ובלי גז לסלמונלה.

זנים אחרים שניתן לכלול בפקד הם: סטפילוקוקוס אאורוס ATCC 25923, אנטוקוקוס פקאליס ATCC 29212. זנים אלה חייבים להיות מעוכבים לחלוטין.

המלצות

-המיקום של צינורות Durham הוא חיוני לחקר קוליפורמים.

-להפיץ את המדיום של מבחנות לפני סטריליזציה, לא אחרי.

-אין להשתמש אם בינוני יש יותר מ 3 חודשים של הכנה.

-אין להשתמש אם יש שינוי במאפיינים הרגילים של המדיום.

הפניות

1. מעבדות בריטניה. EC בינוני. 2015. זמין ב: britanialab.com
2. E. coli . המרכז לביטחון מזון ובריאות הציבור. 2010. זמין ב: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. בינוני EC. זמין ב: foodsafety.neogen.com
4. Neogen בינוני EC שונה עם novobiocin. זמין ב: foodsafety.neogen.com
5. יורה M, Condorí S, Leotta G, Chinen אני, Milywebsky E, Allori C, Aulet O, קסטילו מ 'איתור, בידוד אפיון של Escherichia coli המפיק של רעלן שיגה מבשר טחון טרי מאטליז בקונספסיון, מחוז טוקומאן. Rev Microgol by Arg; 2010, 42 (4): 284-287. זמין בכתובת: www.scielo.org.