מרק לקטוסדו, הכנה ושימושים

ה מרק לקטוז זהו מדיום תרבות נוזלי, לא סלקטיבי, משמש בעיקר כאמצעי-העשרה מראש בבידוד של זני סלמונלה מניתוח מיקרוביולוגית למזונות מעובדים, מוצרי חלב או מים. זה מומלץ על ידי הוועדה הבינלאומית על מפרטים מיקרוביולוגיים למזון (ICMPF).

המדיום מכיל עיכול אנזימטי של ג'לטין, תמצית בשר לקטוז, חומרים הדרושים לצמיחה חיידקית. בנוסף לקטוז הוא פחמימות תסיסה, ולכן כמה קוליפורמים מסוגלים לפצל אותו עם ייצור גז.

לכן, מרק לקטוז מומלץ על ידי האגודה האמריקנית לבריאות הציבור (APHA) ללימוד משוער של חיידקי קוליפורם צואתי מוחלטים, וכינה אותה אלטרנטיבה מצוינת להחליף סולפט מרק לאוריל tryptose טכניקת התקן מספר הסביר ביותר (NMP ), המשמשים לניתוח מיקרוביולוגי של דגימות של מזון, חלב ומים, מים תת קרקעיים, פנאי, פסולת ביתית ותעשייתית.

אינדקס

• 1 קרן
• 2 הכנה
• 3 שימושים
  • 3.1 העשרה מוקדמת
  • 3.2 ניתוח של קוליפורמים טוטליים וצבואיים
• 4 בקרת איכות של המדיום
• 5 הפניות

קרן

לצורך ניתוח מיקרוביולוגי של כמה דגימות, צעד העשרה מוקדמת הוא חיוני כדי להיות מסוגל לשחזר מיקרואורגניזם מסוים שעשוי להיות בכמות נמוכה מאוד או בתנאים שלילי כי להפר או למזער את הכדאיות שלה.

כזה הוא המקרה של מזון יבש ומעובד, אולי מזוהמים Salmonellas sp. במקרים אלה, אם החיידקים נמצאים, הם סבלו התעללות פיזית וכימית במהלך תהליך הייצור של המוצר..

כך מיקרואורגניזמים נחשפים גורמי לוואי כגון התייבשות, חשיפה למוצרים מעכבים או רעילים, וחופפים שנוצרו על ידי הנוכחות של חיידקים אחרים בכמות גדולה יותר, בין יתר.

במובן זה, למקטוס יש השפעה על תיקון מבנים פגומים של מיקרואורגניזם, מה שגרם לה להתאושש ולשכפל, בצורה כזו שהוא יכול להיות מזוהה.

כמו כן, במרק לקטוז יש את היכולת לדלל את החומרים המעכבים שעלולים להשפיע על הכדאיות שלה, ומאפשר את התפתחותה. בנוסף, הרכב התזונה של מרק לקטוז הוא אסטרטגי לטובת הצמיחה של סלמונלה מעל מיקרואורגניזמים אחרים.

עבור הזיהוי הסופי, זה חייב להיות מעובד תת כלפי אמצעים אחרים של גידולים סופי.

מצד שני, הרכב המדיום גם מאפשר גילוי מיקרואורגניזמים לקטוז תסיסה המייצרים גז.

הכנה

כדי להכין ליטר אחד של מרק לקטוז, לשקול 13 גרם של המדיום מיובש להתמוסס 1000 מ"ל של מים מזוקקים.

כדי לעזור להמיס את המדיום במים, אתה יכול לחמם את הפתרון קצת, אבל לא יותר מדי..

לאחר הומוגנית, הפתרון הוא מוכן כדלקמן: אם המרק משמש כדי לחפש קוליפורמים, מתל עם מבחנות, אשר הציגה צינור תסיסת דורהאם מכין פה למטה.

הצינור Durham הוא פרט חשוב מאוד, כי זה יאפשר לזהות את היווצרות של גז, נתונים חשובים בחיפוש אחר coliforms.

כאשר הצינורות מוכנים, 10 מ"ל של מרק לקטוז הוא חילק אותם, אשר חייב להיות מספיק כדי לכסות את צינור Durham כולו..

אם מרק לקטוז הולך לשמש מרק עשרת טרום, אין צורך להציב צינור תסיסה דורהאם. במקרה זה, כמות גדולה יותר של בינוני (225 מ"ל) נדרש, אשר יוגש 500 בקבוקי מ"ל, פה רחב עם כובע בורג עמיד תרמו.

לאחר מכן, צינורות או צלוחיות נלקחים החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

המדיום צריך להישאר ב pH הסופי של 6.9 ± 0.2 0.2 ב 25 ° C.

היינות מאוחסנים במקרר עד שהם משמשים.

לפני השימוש, המרקים חייבים להיות מזג בטמפרטורת החדר.

מצד שני, מרק לקטוז יכול להיות מוכן גם בריכוז כפול.

כמה מעבדות להוסיף סגול bromocresol למרק לקטוז כמו מחוון pH, כדי להראות את צינורות שבו יש תסיסה לקטוז על ידי שינוי צבע. במקרה זה מרק לוקח צבע סגול ואם התסיסה הופך צהוב.

שימושים

במעבדות מיקרוביולוגיה Lactosed מרק משמש נרחב מדיום זולה יחסית המציע אמין ומהיר תוצאות (24-48 שעות).

זה יכול לשמש לניתוח של קוליפורמים סה"כ צואה ו מים או מזון או כמו מראש העשרת מרק סלמונלה.

העשרה מוקדמת

העשרה מוקדמת היא צעד לפני העשרה של המדגם, אשר משפר מאוד את ההתאוששות של חיידקים של סלמונלה סוג במזונות מעובדים.

כדי לעשות זאת, המדגם של מזון מוצק (25 גרם) או נוזלי (25 מ"ל) הוא seeded ב 225 מ"ל של מרק לקטוז, ו מודגרות במשך 24 עד 48 שעות. לאחר מכן, מרק cystenite ציסטין או מרק tetrathionate יהיה תת תרבותיים במדיום מועשר. לאחר מכן הוא עובר אל המדיה הסלקטיבית XLD ו- SS.

ניתוח של קוליפורמים סך הכל צואתי

זהו אמצעי מצוין כמו אינדיקטור של זיהום צואה.

לכן, מרק הלקטוז הוא אידיאלי עבור השלב המשוער של המחקר קוליפורם על ידי שיטת המספר הסביר ביותר.

לקבלת דוגמיות שבו מספר גדול של קוליפורמים חשוד סכום נמוך ממנו (1 מ"ל) היה מחוסן, ואילו עבור דגימות שבו קוליפורמים פחות נפח דגימה חשודים נוספים (10 מ"ל) הוא מחוסן.

10 דילולים נעשים לניתוח^-1, 10^-2, 10^-3, ויצרו סוללה 3-5 צינור עבור כל ריכוז בשימוש.

מכל דילול נפח זהה נזרע למרקס לקטוז.

צינורות מודגרות במשך 24 שעות. המרקים שלילי מודגרת במשך 24 שעות יותר.

הפרשנות של התוצאות נעשית על ידי התבוננות בשני מאפיינים: הראשון הוא נוכחות או היעדרות של עכירות וכמדיום זה אינו מכיל מחוון pH, לא יהיה שינוי בצבע.

השני הוא ייצור או לא של גז. הגז הוא הוכיח בקלות בצינור Durham, על ידי הופעתו של בועות אחד או יותר בפנים.

זה נחשב חיובי אם שני המאפיינים נצפו, כלומר, עכירות עם ייצור גז. צינורות חיוביים צריך להיות seeded מחדש בתקשורת לאשר (מרק מבריק גרין 2% ביילה מרק EC).

בקרת איכות של המדיום

- בהכנת המדיום חשוב לא לשכוח לשים את צינורות Durhams אם המטרה של אותו הוא המחקר של קוליפורמים.

- לא לחמם את המדיום לפני עיקור.

- להפיץ את מבחנות לפני סטריליזציה, לא אחרי.

- אין להשתמש אם בינוני יש יותר מ 3 חודשים של הכנה.

- אל תשתמש אם אתה מבחין בשינוי במאפיינים הרגילים של המדיום.

- בעת הכנת אצווה של מרק לקטוז, לבדוק את איכות זה על ידי זריעת זנים המכונה Escherichia coli, אנטרוקטין , סיטרובקטר ו דלקת ריאות קלבסילה. הם גדלים היטב, עם ייצור גז (שליטה חיובית).

- זה יכול לכלול גם Pseudomonas aeruginosa, סלמונלה typhimurium o אנטוקוקוס פקאליס, כי לגדול היטב, אבל ללא ייצור גז (שליטה שלילית).

- יצוין כי הצבע המקורי של המדיום מיובש הוא בז 'וזה של המדיום מוכן מאוד ברור ושקוף צהוב. אם יש שינוי בצבע או במראה, ייתכן שיש הידרדרות של אותו.

הפניות

1. Acevedo R, Severiche C, קסטילו מ ביולוגיה מיקרוביולוגיה סביבתית. (2013) מהדורה ראשונה. אוניברסיטת קרטגנס, קולומביה.
2. Camacho A, Giles M, אורטגון A, Palao M, Serrano B ו Velázquez O (2009). טכניקות לניתוח מיקרוביולוגי של מזון. מהדורה שנייה. הפקולטה לכימיה, UNAM. מקסיקו.
3. מעבדות קונדה פרונאדיסה. 2017. ריכוז מרק לקטוז כפול (European Pharm).
4. פרננדז-רנדון C, Barrera-Escorcia G. השוואה בין טכניקות להפקת חיידקי קוליפורם משקע האגם של Xochimilco, מקסיקו. הכומר. מיקרוביול.  2013; 45 (3): 180-184. זמין ב: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. קביעת האיכות המיקרוביולוגית של מי באר בארזיה של המחוזות במרכזי, קורדיירה ומחוזות ההון. ממציא. סינק. בריאות 2013; 11 (1): 5-14. זמין מ: scielo.iics.