קרן אגר TSI, הכנה ושימושים

ה אגר TSI או ברזל אגר סוכר משולש הוא בינוני תרבות מוצק המשמש בדיקה ביוכימית כדי להנחות את הזיהוי הראשוני של bramilli שלילי גראם. הוא מבוסס על עדות תסיסה של הסוכרים הנוכחי, ואת הייצור של מימן גופרתי וגז.

ההרכב והיסוד שלו דומים מאוד למבחן הברזל של קליגלר, כאשר ההבדל ביניהם מכיל רק גלוקוזה ולקטוז. במקום זאת, כפי שהשם מרמז, ברזל ברזל משולש מכיל שלושה פחמימות מתסכלות: גלוקוז, לקטוז וסוכרוז..

בנוסף, בינוני TSI יש ארבעה נגזרות חלבונים שהופכים אותו אגר מזין מאוד: תמצית שמרים, תמצית בשר, פפטון ופפטון חלבונים. הוא מכיל גם גופרתי אמוניום ברזל, thiosulfate נתרן, נתרן כלורי, פנול אדום אגר.

חוסר היכולת של מיקרואורגניזם כדי לתסוס את גלוקוז נוכח בינוני מיד לא כולל אותו להשתייך למשפחה Enterobacteriaceae. לפיכך, מבחן זה הוא חיוני כדי להחליט איזה תוואי זיהוי יש לנקוט כדי לקבוע את הסוג ואת המין.

כל מעבדה מחליטה אם זה עובד עם אגר TSI או אגר אגר Kligler.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 סודיום כלורי ו אגר
  • 1.2 מחוון pH (פנול אדום)
  • 1.3 נגזרות חלבונים (תמצית שמרים, תמצית בשר, פפטון ופפטון חלבונים)
  • 1.4 תסיסה של פחמימות (גלוקוז, לקטוז וסוכרוז)
  • 1.5 ייצור גז
  • 1.6 נתרן thiosulfate ו אמוניום סולפט ברזל (ייצור של מימן גופרתי)
• 2 הכנה
• 3 שימושים
• 4 זרע
• 5 מגבלות
• 6 הפניות

קרן

כל אחד מהמרכיבים ממלא תפקיד בתוך המדיום.

סודיום כלורי ו אגר

נתרן כלורי יש צורך לשמור על שיווי המשקל האוסמוטי של המדיום. בעוד אגר נותן את עקביות מוצק.

מחוון PH (אדום פנול)

ה- pH של המדיום המוכן מאוזן ל- 7.3 ומחוון ה- pH (אדום פנול) הופך צהוב מתחת 6.8. משמעות הדבר היא כי כמויות קטנות של חומצה המיוצר על ידי התסיסה של סוכרים יהפוך את המדיום מ אדום כתום לצהוב.

אם התסיסה לא תתרחש יהיה אלקליניזציה של המדיום על ידי שימוש של peptones, מפנה אדום כתום לאדום חזק.

נגזרות חלבונים (תמצית שמרים, תמצית בשר, פפטון ופפטון חלבונים)

כאשר חיידקים metabolize את החלבונים הנוכחי אגר TSI, אמינים מיוצרים כי אלקליז בינוני (בעיקר ברמת שפוע), כי התגובה צריכה חמצן. האמינים הופכים את הלוח הקדמי לאדום חזק.

אבל זה יהיה תלוי ביכולת של חיידקים לתסיסה פחמימות או לא.

תסיסה של פחמימות (גלוקוז, לקטוז וסוכרוז)

המחקר של התסיסה של סוכרים יכול לתת כמה תמונות וכל אחד הוא פירש אחרת. הפרשנות של המבחן מחלק את המיקרואורגניזמים לשלוש קטגוריות: פרמנטורים שאינם גלוקוז, פרמנטורים שאינם לקטוזיים ומוצרי לקטוז / סוכרוז.

יש לציין כי כמות הגלוקוז במדיום מוגבלת, בעוד הריכוז של לקטוז וסוכרוז גבוה פי 10.

החיידקים של המשפחה Enterobacteriaceae אחרים מיקרואורגניזמים גלוקוז תוסס יתחילו להתסיס את הסוכר כי זה הפחמימות הפשוטה ביותר עבור אנרגיה..

מצד שני, לקטוז סוכרוז הם פחמימות מורכבות שיש לשבור ולהמיר גלוקוז, כך שהם יכולים להיכנס מחזור Embeden-Meyerhof.

-מיקרואורגניזמים של גלוקוז ללא תסיסה

כאשר מיקרואורגניזם מחוסן אינו מסוגל תסיסה גלוקוז, הרבה פחות יכול להתסיס פחמימות אחרות. לכן, חומצות אינן נוצרות כאן, אבל יש היווצרות אמינים של שפוע בשל השימוש peptones.

במקרה זה שפוע הופך אדום חזק התחתון של הצינור יכול להישאר ללא שינוי או יכול להיות גם alkalized, עוזב את צינור אדום כולו.

פרשנות: K / K פירושו בקיע אלקליני / אלקליני או רקע ניטרלי

בתמונה כי הוא בתחילת המאמר לראות את התמונה של צינור D.

תוצאה זו עולה כי מיקרואורגניזם אינו שייך למשפחה Enterobacteriaceae.

-מיקרואורגניזמים שאינם תוססים של לקטוז / סוכרוז

אם החיידקים מסוגלים לתסוס גלוקוז אך לא לקטוז או סוכרוז, יקרה הדבר הבא:

החיידק יצרוך את כל גלוקוז נוכח לאחר כ 6 עד 8 שעות, להיות מסוגל לחמצן הן את שפוע ואת הטאקו; כלומר, אגר יהפוך לחלוטין צהוב. אבל כאשר גלוקוז הוא מדולדל וחוסר יכולת לקטוז סוכרוז, החיידקים יתחילו את חילוף החומרים של חלבונים.

תגובה זו צריכה חמצן, ולכן השפלה של peptones מתרחשת על פני השטח (שפוע). האמינים המיוצרים את הלוח הקדמי על ידי הפיכת צהוב לאדום. תגובה זו ניכרת בגילאים 18-24 שעות של הדגירה.

פרשנות: K / A אמצעי שפוע אלקליין חומצה טאקו.

בתמונה כי הוא בתחילת המאמר לראות את התמונה של צינור B.

-לקטוז / סוכרוז תוסס מיקרואורגניזמים

ברור, מיקרואורגניזמים המסוגלים התסיסה לקטוז סוכרוז יכול תסיס גלוקוז. אחרי הכמות המינימאלית של גלוקוז נוכח המדיום מתרוקנת, את פירובט נוצר מתחיל לעכל כדי ליצור חומצות דרך מעגל קרבס אירובי, ואת לתקופה של 8 עד 12 שעות כל המדיום הוא צהובה.

אם החיידק מסוגל לפצל לקטוז או סוכרוז, חומצות ימשיכו להיות מיוצרים, ולאחר 18-24 שעות כל צינור - מקור טקו - יישאר צהוב.

יש לציין כי השימוש בגלוקוז נעשה בשתי דרכים: האחד בצורה אירובית בשפופרת של הצינור, והשני אנאירובית בתחתית הצינור.

פרשנות: A / A פירושו חומצה שפוע / חומצה התחתונה. זה יכול להציג גז או לא.

בתמונה כי הוא בתחילת המאמר לראות את התמונה של צינור A.

ייצור גז

כמה מיקרואורגניזמים מסוגלים לייצר גז במהלך התסיסה של סוכרים. הגז ניכרת בצינור על ידי הלחץ שהוא מפעיל בתוך אגר. הלחץ גורם להיווצרות בועות או העקירה של אגר. לפעמים היווצרות גז יכולה לשבור את המדיום.

חשוב כי בעת זריעת המדיום TSI, לנקב נעשה נקי על ידי מרכז אגר עד שהוא מגיע לתחתית. אם הנקב מופנה לעבר הקירות של הצינור, הוא עלול לגרום לתוצאות חיוביות שגויות בייצור הגז, שכן הוא יברח דרך הערוץ שנוצר בצורה לא נכונה.

ייצור גז התגובות המתרחשות אגר bezel, זקוקים לחמצן, ולכן מומלץ כי הצינור מחובר עם תקע כותנה, ואם כובע בקליט משמש, זה לא צריך להיות מוגדר לחלוטין.

ייצור הגז הוא דיווח חיובי (+) או שלילי (-).

נתרן thiosulfate ו אמוניום סולפט ברזל (הפקת מימן גופרתי)

חיידקים המסוגלים לייצר מימן גופרתי (גז חסר צבע), לקחת את הגופרית של thiosulfate נתרן נוכח בינוני. לאחר H נוצר₂S מגיב עם אמוניום גופריתי ברזל, לייצר גופרית ברזל (משקע שחור נראה בבירור).

הפקה של H₂S מדווח כחיובית (+) או שלילית (-).

בתמונה כי הוא בתחילת המאמר לראות את התמונה של הצינור C.

הכנה

לשקול 62.5 גרם של סוכר מיובש סוכר סוכר (TSI) אגר להתמוסס ליטר אחד של מים מזוקקים.

מחממים עד אגר הוא מומס לחלוטין. מרתיחים לרגע. הפץ 4 מ"ל של המדיום 13/100 מבחנות עם מכסה כותנה.

לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. הסר מן החיטוי לאפשר לנוח בצורה משופעת. יש להקפיד כי גם הבסיס ואת הלוח יש את אותו המרחק.

חנות במקרר 2-8 ° C. אפשר למזג לפני שתילת זן חיידקי.

צבע המדיום המיובש הוא בז 'בהיר והמדיום המתוכנן הוא כתום אדום

ה- pH הסופי של המדיום מוכן הוא 7.3 ± 0.2.

שימושים

הבדיקה TSI נעשה שימוש נרחב ברמה של המעבדה מיקרוביולוגיה. בדיקה זו היא חיונית כדי להנחות את סוג הבדיקה כי יש להחיל כדי להגיע לזיהוי של המין ואת המין. ביצוע טוב שלה פרשנות יכול להציל חומר ועבודה.

אם התוצאה היא מבחן מונואמין TSI K / K ו ציטוכרום הוא חיובי, אולם ידוע כי בדיקות לזיהוי אי-fermenters כגון Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia גראם שליליים חיידקים, בין ז'אנרים אחרים יש להשתמש. אם זה oxidase שלילי הוא מכוונת כלפי acenetobacter גנרא, Stenotrophomonas, וכו '.

אבל אם אתה מקבל TSI A / או K / A ו- מבחן מונואמין ציטוכרום הוא שלילי, לצמצם עוד יותר חנקות כדי ניטריטים, יש ודאות שמדובר מיקרואורגניזם השייכת למשפחת Enterobacteriaceae. במקרה זה, נתיב הזיהוי יכוון לבדיקות ספציפיות עבור קבוצה זו של חיידקים.

יתר על כן, אם K / A או A / בדיקת תמונה ציטוכרום אוקסידאז הוא חיובי מתקבל, בדיקות נוספות כדי לרכוב יהיה שמטרתו לאתר זנים התססה לא השייכת למשפחת Enterobacteriaceae, כגון Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio ו Pasteurella.

A TSI עם מימן גופרתי, אוקסידאז שלילי, ינחה את הזיהוי של הגנרל הבא של המשפחה Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, פראגיה, Trabusiella או סלמונלה.

A TSI עם גופרית מימן נדירים או מתונים בשפוע אלקליין עם תחתית אלקליין וחמצון חיובי ינחה את השימוש במבחנים לזיהוי של bacilli שלילי של גראם,₂S, כגון שיאוואלה.

לבסוף, TSI יכול לשמש לחקירת הייצור של מימן גופרתי ב Bramilli חיוביות גרם, במיוחד כאשר הוא חשוד Erysipelothrix rhusiopathiae.

נזרע

המדיום TSI חייב להיות מחוסן עם מושבות טהורות, מבודדים תרבויות ראשוני או סלקטיבי. אם המושבה נלקחת מתוך תקשורת סלקטיבית היו זורעות עם דגימות פלורה מעורבות, יש להקפיד רק מפני השטח כפי תחתון של המושבה יכולה להתקיים זני קיימא עכבות בסביבה כי.

לכן, הלולאה לא צריך להיות מקורר במדיום סלקטיבי ואז לקחת את המושבה לחסן בינוני TSI.

נטיעת ייעשה עם לולאה ישר או מחט. ניקוב יבוצע, דואג כי זה דרך מרכז באמצע עד להגיע לתחתית, ולאחר מכן את השתילה הוא סיים inoculating את פני השטח בזיגזג הדרך. אל תעשה שני נקבים.

לדגור על 37 מעלות צלזיוס ב Aerobiosis עבור 18-24 שעות. לפרש בשלב זה, לא לפני ולא לאחר.

מגבלות

מבחן TSI יש לקרוא בין 18-24 שעות של הדגירה. קריאה לפני זמן זה יכול לתת חיובי כוזב של תסיסה A / A. והואיל, קריאה לאחר זמן זה, יכול להוליד דימוי שלילי שקר של non-fermentor, בשל צריכת peptones כי אלקליז בינוני.

הפניות

1. Mac Faddin ג 'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית. עריכה פנמריקנה. בואנוס איירס ארגנטינה.
2. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
3. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
4. "אגר TSI." ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. 10 Jul 2018, 08:09 UTC. 10 בפברואר 2019, 03:33 זמין ב: en.wikipedia.org
5. מעבדות בריטניה. TSI אגר (טרי אגר ברזל סוכר). 2015. זמין ב: britanialab.com
6. מעבדות BD אגר ברזל משולש אגר (TSI אגר). 2003. זמין ב: bd.com