אגר Thayer מרטין יסוד, הכנה ושימושים

ה Thar מרטין אגר זהו בינוני מוצק מאוד סלקטיבי מוצק לבידוד של Neisseria maningitidis ו Neisseria gonorrhoeae; שניהם ידועים כפתרוניים או חשובים מבחינה נייסרית.

אחד המאפיינים המיוחדים החשובים ביותר של אגר Thay מרטין הוא התוכן הגבוה של תוספי תזונה. נכס זה הוא חיוני, כי Neisserias הם מאוד תובעניים מיקרואורגניזמים מנקודת מבט תזונתיים ולכן אינם גדלים במדיה משותפת.

יתר על כן, בגלל מיקרואורגניזמים אלה נמצאים בדרך כלל באזורי nonsterile הוספה מעכבים כדי למנוע הצמיחה של צמחייה אחרת יש צורך, מבלי להשפיע על ההתפתחות של הסוג Neisseria.

אגר זה מורכב אגר בסיס GC, המוגלובין, תוספי תזונה נוספים קומפלקס של חומרים מעכבים (אנטיביוטיקה ו antifungals). בתים מסחריים מוכרים כל אחד מהספקים בנפרד.

המדגם להיות נטוע במדיום זה יהיה תלוי מיקרואורגניזם כי הוא חיפש. כדי נייסריה gonorrhoeae הדגימות האידיאליות הן הפרשות נרתיקיות ושופכה. בעוד נייסריה מאניטיטידיס הדגימות הנפוצות ביותר הן CSF, paryngeal ו nasopharyngeal exudates.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 אגר בסיס GC
  • 1.2 המוגלובין
  • 1.3 תוספת העשרה
  • 1.4 מעכבים
• 2 הכנה
  • 2.1 מקורי אגר מרטין אגר
  • 2.2 אגר תאייר מרטין שונה
• 3 השתמש
• 4 בקרת איכות
• 5 מגבלות
• 6 הפניות

קרן

ה"נייסריאס "הם מיקרואורגניזמים המסווגים כמטרידים ולכן הבידוד שלהם קשה. מסיבה זו, Thayer Martín הוא מדיום מורכב וכל אחד ממרכיביו ממלא תפקיד מוסבר להלן:

GC אגר הליבה

אגר GC המכיל proteose peptone, עמילן תירס, נתרן כלורי, פוספט dipotassium, פוספט monopotassium ואת אגר. מרכיביו מספקים את החומרים המזינים הבסיסיים לפיתוח מיקרוביאלי, לנטרל חומצות שומן רעילות, לתרום לשמירה על איזון אוסמוטי, להגדיר pH ולספק עקביות מוצקה לסביבה.

המוגלובין

המוגלובין מספק גורמים V ו- X (nicotinamide adenine dinucleotide NAD ו hemin, בהתאמה). לכן, בסביבה זו, המינים המופילוס גם לגדול. המוגלובין ניתן להשיג מסחרית בצורת מיובש או דם טרי dovibrinated בשר ניתן להוסיף בינוני.

תוספת העשרה

יתר על כן, הממוצע תאייר-מרטין יהיה גם הוספת העשרה תוספת, בגלל החומרים המזינים המכילים את הבסיס אגר אינם מספיקים עבור הדרישות של הסוג Neisseria.

תוסף ההעשרה הנפוץ ביותר נקרא isovitalex. זה מכיל גלוטמין, אדנין, NAD, cocarboxylase, גואנין, חנקתי וברזל, p-אמינו חומצה בנזואית, ויטמין B12, תיאמין גלוקוז. כל התרכובות הללו נחוצים להתפתחות נאותה של נייסריה פתוגנית.

מעכבים

בגלל זה הוא בינוני מזין מאוד, מעכבים יש להשתמש כדי למנוע את הצמיחה של מיקרואורגניזמים של הצומח הרגיל של האזור ובכך לטובת בידוד של הסוג Neisseria..

המעכב מורכב מורכב vancomycin, קוליסטין ו ניסטטין. Vancomycin מעכב את הצמיחה של חיידקים חיוביים גראם, colistin מונעת התפתחות של חיידקים גראם שליליים כגון Pseudomonas וכמה Neisseria saprophytic, ו nystatin פועל על השמרים כפי קנדידה אלביקנים.

עם זאת, אז אגר Thay מרטין שונה; השינויים כללו תוספת של trimethoprim, את הגידול בכמות אגר ואת תוספת של גלוקוז נוסף. שינויים אלה שיפרו משמעותית את ההתאוששות של מינים נייסריה גונוראהי.

יש לציין כי trimethoprim מעכב את הצמיחה של הסוג פרוטיוס ואת ההרכב שנוצר שלה של נחיל. במובן זה, אנטיביוטיקה הם מה לספק את הטבע סלקטיבי בינוני תייר מרטין.

הכנה

טאייר מרטין אגר מקורי

-GC אג

לשקול 8.2 גרם של מדיום GC מיובש להשעות ב 100 מ"ל. מערבבים ומרתיחים במשך דקה אחת עם ערבוב תכופים להתמוסס בשלמותו. לעקר את התערובת החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

-2% המוגלובין

להשעות 2 גרם של המוגלובין מיובש ב 2 או 3 מ"ל של מים מזוקקים חמים ליצירת תערובת אחידה. הוסף מעט על ידי מעט מים נוספים כדי להשלים נפח של 100 מ"ל. ההשעיה חייבת להיות הומוגנית לפני עיקור.

לעקר החיטוי במשך 15 דקות.

-תוספת העשרה

לשחזר את הכביש המסחרי עם diluent המסופקים על ידי אותו בית מסחרי. מערבבים היטב. כמות המדליה שישמשו תפורט בהוראות הערכה..

-תוספת עיכוב V.C.N (vancomycin, colistin, nystatin)

לשחזר את הבקבוקון עם diluent המסופקים על ידי בית מסחרי. מערבבים היטב. כמות המדליה שישמשו תפורט בהוראות הערכה..

-מוכן

עבור כל 100 מ"ל של אגר GC להמשיך כדלקמן:

כאשר עוזבים את אגר GC החיטוי, להתקרר לטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס ומוסיפים 2 מ"ל של הפתרון המוגלובין מוכן, מוסף 2 העשרה מ"ל (isobitalex או britalex), ו 2 מ"ל של עיכוב תוסף. מערבבים ומגישים בצלחות פטרי סטריליות.

אפשר לחזק ולאחסן במקרר עד לשימוש.

הצבע של המדיום מוכן הוא אדום דובדבן. ה- pH הסופי של המדיום הוא 7.2 ± 0.2

השתנה Thayer מרטין אגר

לשקול 8.2 גרם של מדיום GC מיובש להשעות ב 100 מ"ל. מוסיפים 1 גרם של אגר ומוסיפים 0.3 גרם של גלוקוז. מערבבים ומרתיחים במשך דקה אחת עם ערבוב תכופים להתמוסס בשלמותו. לעקר את התערובת החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

הכינו המוגלובין ותוסף העשרה כמתואר לעיל.

תוסף העיכוב הוא V.C.N.T (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).

-מוכן

המשך כמתואר עבור אגר Thayer מרטין המקורי.

השתמש

אגר Thay מרטין צריך להיות מזג לפני זריעה דגימות. הדגימות הנפוצות הן exudates הלוע, exodates האף, הנרתיק, השופכה ו / או הפרשת רקטלית CSF..

השתמש דגימות שנלקחו טריים לעשות inocula חזק על אגר. דגימות נזרעים ישירות על ידי פריקה חומר ולאחר מכן מופשטים על ידי דלדול על פני השטח.

צלחות מודגרת על 35-37 מעלות צלזיוס במשך 24 עד 48 שעות בצנצנת microaerophilic (5% CO₂). בסוף תקופת הדגירה נבחנות הצלחות עבור מושבות קטנות, אפורות ולעתים ריריות..

בצע בדיקות גרמניות ובדיקות ביוכימיות מושבות חשודות.

בקרת איכות

כדי לבצע את בקרת האיכות של אגר Thay מרטין, זנים מיקרוביאליים הבאים ניתן להשתמש.

נייסריה גונוראהי ATCC 49226 ו נייסריה מאניטיטידיס ATCC 13090; בשני המתחים צפויה התפתחות משביעת רצון.

את הזנים הבאים יש לכלול גם: סטפילוקוקוס אפידרמידיס ATC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, פרוטאוס מיראביליס ATCC 43071 ו קנדידה אלביקנים ATCC 10231. בכולן צפוי עיכוב מוחלט או חלקי במדיום זה.

מגבלות

-יש לזכור כי חיידקים העמידים בפני מעכבי בשימוש יכול לגדול במדיום..

-יש זנים של נייסריה gonorrhoeae אשר עשוי להיות רגיש לריכוז של vancomycin בשימוש. מסיבה זו מומלץ להשתמש אגר שוקולד בתוספת isovitalex במקביל, אך ללא מעכבים.

-ישנם זנים של שמרים עמידים ניסטטין שיכול לגדול בינוני זה להפריע לבידוד של נייסריה פתוגניים, במיוחד gonococci..

הפניות

1. מעבדות אבחון ואלטק. אגר ת'אייר-מרטין. זמין ב: com
2. מעבדות בריטניה. בינוני תאייר מרטין השתנה. 2010. זמין בכתובת: britanialab.com
3. תורמים ויקיפדיה. אגר ת'אייר-מרטין. ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. 26 באוקטובר, 2017, 16:33 UTC. זמין ב: wikipedia.org. גישה לפברואר 28, 2019.
4. מעבדות בריטניה. GC אגר. 2010. זמין בכתובת: britanialab.com.
5. מעבדות BBL ™ העשרה בינונית עבור מיקרואורגניזמים מהימנים. 1999. זמין ב: bd.com
6. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.