אגר TCBS יסוד, הכנה ושימוש

ה TCBS אגר הוא מאוד סלקטיבי ודיפרנציאלי בינוני בינוני מוצק, המשמש לבידוד ותרבות של חיידקים Vibrio, במיוחד ויבריו כולרה, V. vulnificus ו V. parahaemolyticus כמו פתוגנים העיקריים של הסוג הזה.

ראשי תיבות TCBS פירושו thiosulfate ציטראט מרה סוכרוז. אגר זה ידוע גם בינוני סלקטיבי עבור Vibrios. הנוסחה המקורית נוצרה על ידי Nakanishi ולאחר מכן שונה על ידי Kobayashi.

זה מורכב של תמצית שמרים, בשר peptone, trypticase, נתרן ציטרט, thiosulfate נתרן, מרת שור, סוכרוז, נתרן כלורי, ציטראט וברזל, ברומותימול הכחול, תימול כחול אגרו.

הרכב זה מאפשר התפתחות נאותה של מינים Vibrio מים, צואה ודגימות מזון; למעט ויבריו הוליסה, זה לא גדל במדיום הזה. בנוסף, המדיום TCBS מסוגל לעכב את הצמיחה של חיידקים נלווים אחרים, בעיקר קוליפורמים.

בשל בעיות גסטרואינטסטינאליות ובעיות מעיים חמורות, כי כמה מינים של סוג Vibrio לייצר, האבחנה שלהם הוא מאוד חשוב. האדם נגוע בעיקר בצריכת מזון ים גולמי או לא מבושל או במים מזוהמים, אלא גם באמצעות זיהום פצעים.

בגלל זה, מעבדות קליניות צריך לכלול TCBS אגר במחקר של תרבויות צואה של דגימות צואה נוזלי, במיוחד עם המראה של מים אורז. במיוחד אם המטופל מדווח כי היה במגע עם מי ים או צורך מאכלי ים או דגים.

אינדקס

• 1 קרן
• 2 הכנה
• 3 השתמש
• 4 זרע
• 5 הגבלה
• 6 בקרת איכות
• 7 הפניות

קרן

תמצית שמרים, פפטונים בשר, טריפטין הם המקור התזונתי של המדיום הזה. עם זאת, TCBS אגר הוא בינוני inhospitable עבור רוב החיידקים.

הסלקטיביות הגבוהה שלו ניתנת על ידי תוספת של ציטרט נתרן שור המרה; שניהם מעכבים סוכנים כי גם לספק pH אלקליין בינוני, המגביל את הצמיחה של הצומח הנלווה ואת העדפה לצמיחה של V. cholerae, בין מינים אחרים. יש לציין כי ויבריו כולרה הוא מאוד רגיש צרבת.

מצידה, נתרן כלורי יתרות אוסמוטי למדיום. בנוסף, כמו ריכוז גבוה, הוא פועל גם כסוכן מעכב, לטובת הצמיחה של חיידקים הלופילי.

Sucrose הוא סוכר תסיסה כי יחד עם מחוונים pH כחול של bromothymol ו תימול כחול לתת את אופי ההפרש בינוני. מסיבה זו, עם זה אומר ניתן להבדיל זנים סוכרים surose מ זנים שאינם מותסס.

המושבות של זנים סוכרוז תסיסה לפתח צבע צהוב יהפוך את המדיום מירוק לצהוב עקב ייצור של חומצות. הלא fermentors לגדול שקוף בינוני נשאר הצבע המקורי (ירוק).

כמו כן, המדיום מכיל thiosulfate נתרן כמקור של גופרית ו סיטריט Ferric כסוכן חושף. שניהם מראים את החיידקים המסוגלים לייצר מימן גופרתי (גז חסר צבע). ח₂S נוצר מן thiosulfate ומאוחר יותר להגיב עם סיריק ferric צורות גליות שחורות גלוי.

לבסוף, אגר הוא מה שנותן את עקביות מוצק בינוני.

הכנה

לשקול 89 גרם של המדיום מיובש להתמוסס ליטר אחד של מים מזוקקים. עזרה לפירוק על ידי חימום ותסיסה תכופה. תערובת יכול להיות מבושל במשך 2 דקות.

המדיום הזה אינו אוטוקלאב. לאחר פירוק זה הוא שירת ישירות על צלחות סטריליות. כאשר התמצקות, הם מסודרים בצורה הפוכה של מקבלי רובד מאוחסנים במקרר (2-8 מעלות צלזיוס) עד שהם משמשים.

המדיום לאחר ההכנה צריך להיות ב pH 8.6 ± 0.2.

צבעו של המדיום המיובש הוא בצבע בז 'בהיר או בגוון ירקרק, וצבעו של המדיום הוא ירוק יער או ירוק כחלחל.

חשוב להשאיר את הצלחות הרפיה לפני זריעת הדגימות.

השתמש

המדגם הנפוץ ביותר עבור בידוד של Vibrios הם שרפרפים שלשול.

דגימות צואה אם ​​הם לא יכולים להיות seeded מיד על המדיום סלקטיבית, חייב להיות מועבר באמצע קרי בלייר.

כדי להגדיל את הרגישות של היבול, בצואה יכולה להיות מועברת על ידי אותו במים peptone ב- pH 8.4 כמדיום והעשרה מקסימלית 8 שעות, ומשם TCBS המדיום הוא subcultured.

כמו כן יש לזכור כי כמה זנים של Vibrio יכול לגרום לאלח דם בחולים immunosuppressed, כך שניתן יהיה מבודד מתרבויות דם. כמו כן, ניתן לנתח דגימות של מים ומזון מן הים כאשר יש התפרצויות מגיפה של מחלת כולרה.

נזרע

את inoculum של המדגם תחת המחקר חייב להיות בולט, זריעת נעשית על ידי שיטה של ​​הפשטה על ידי תשישות. הצלחות מודגרת על 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות ב Aerobiosis.

המושבות היומרניות של ויבריו כולרה הם בינוניים, חלק, אטום, עם קצוות דקות וצהוב כי הם התסיסה סוכרוז..

באופן דומה, המין של V. alginolyticus, V. fluvialis, V. Hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii וכמה V. vulnificus. מינים אחרים של Vibrios חשוב מבחינה רפואית כמו V. parahaemolyticus לא תסיסה סוכרוז, פיתוח מושבות ירוק זית.

יתר על כן, יש לזכור כי כמה זנים של Aeromonas ו Plesiomonas הם מונואמין (+) יכול לגדול על המדיום הזה, מתפתח מושבות צהובות שיכול לבלבל את המטפל. בעוד כמה זנים של Pseudomonas גם oxidase (+) לגדול כמו מושבות ירוקות, כמו גם V. parahaemolyticus.

הגבלה

בדיקת oxidase כי הוא חיובי עבור סוג Vibrio לא צריך להתבצע מושבות המתקבל אגר TCBS, כמו התוצאה המתקבלת תהיה שלילית שווא. תרכובות המדיום מפריעות מאוד במבחן זה. לכן, זה צריך להיעשות מתרבויות על אגר דם.

בקרת איכות

כדי להוכיח כי המדיום במצב טוב, מומלץ לשתול זנים שליטה ידוע או מוסמך ולבחון אם הצמיחה עונה על המאפיינים הצפויים.

לשם כך, זנים של:

-ויבריו כולרה - צמיחה משביעת רצון (מושבות צהובות, גבול שקוף).

-ויבריו - צמיחה משביעת רצון (מושבה עם מרכז ירוק שקוף למחצה).

-ויבריו ATCC 17749 - צמיחה משביעת רצון (מושבות צהובות עם הילות באותו צבע סביב המושבה).

-אנטוקוקוס פקאליס ATCC 29212 - עיכוב כולל או חלקי (מושבות קטנות צהובות או שקופות).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- עיכוב חלקי או מוחלט (מושבות כחולות).

-Escherichia coli ATCC 25922 - מעוכבת לחלוטין.

-פרוטאוס מיראביליס ATCC 43071 - עיכוב כולל או חלקי. (מושבות קטנות במרכז שקוף שקוף).

הדגירה של מדיום לא מאוכלס לא צריכה להשתנות.

הפניות

1. דיקו פרנסיסקו סוריה מעבדות מלגיזו. TCBS אגר. 2009. זמין ב: f-soria.es
2. מעב. BD. TCBS Agar 2003. זמין ב: bd.com
3. מעבדות בריטניה. TCBS בינוני. 2015. זמין ב: britanialab.com
4. מעבדות אקומדיה TCBS אגר. 2016. זמין ב: foodsafety.neogen.com
5. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
6. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.