אגר דם בסיס, משתמש והכנה

ה אגר דם זה בינוני מוצק מועשר, דיפרנציאלי אבל לא סלקטיבי. הוא משמש להתאוששות ולצמיחה של מגוון רחב של מיקרואורגניזמים מדגימות קליניות או תת תרבויות.

אגר דם קלאסי יש לכלול עבור זריעת של רוב דגימות קליניות שהתקבלו במעבדה; למעט דגימות צואה כאשר הוא אינו שימושי, אלא אם כן מוכן עם שינויים מסוימים.

בינוני זה תרבות מורכב בעצם של אגר בסיס מועשר ו 5% דם. בסיס אגר יכול להשתנות בהתאם לצרכים, אבל בעיקר יהיה מורכב פפטונים, חומצות אמינו, ויטמינים, תמצית בשר, נתרן כלורי, אגר, בין היתר.

באשר לדם, זה בדרך כלל נדרש כדי ליצור קשר עם bioterium כדי לקבל דם מבעלי חיים, כגון כבשים, ארנב או סוס. עם זאת, זה לא תמיד אפשרי ולפעמים הדם האנושי משמש.

בינוני אגר הדם יכול להיות מוכן במעבדה או ניתן לרכוש מוכן לחברות המוקדשים לו. ההכנה של המדיום הזה הוא אחד עדין ביותר, כל רשלנות בהכנה שלה תגרום אצווה מזוהמת.

לכן כל אמצעי הזהירות האפשריים יש לנקוט בסופו של דבר בקרת איכות צריך להיעשות ב incubating ב 37 מעלות צלזיוס 1 צלחת עבור כל 100 כי הוא מוכן.

אינדקס

• 1 קרן
• 2 שימושים
  • 2.1 בחירה של סוג הדם
  • 2.2 בחירה של סוג אגר בסיס
  • 2.3 שימושים של אגר דם לפי מדיום הבסיס המשמש להכנתו
• 3 הכנה
  • 3.1 לשקול ולפזר
  • 3.2 לעקר
  • 3.3 צבירת דם
  • 3.4 יוצקים לתוך צלחות פטרי
• 4 הפניות

קרן

כבר נזכר כי אגר הדם יש את המאפיין של להיות מועשר, דיפרנציאלי ולא סלקטיבי בינוני. במרתף של כל אחד מהנכסים הללו מוסבר להלן.

אגר דם הוא בינוני מועשר כי יש כתוסף העיקרי 5-10% דם על בסיס אגר. שני המרכיבים מכילים חומרים מזינים רבים ומאפיין זה מאפשר את רוב החיידקים המתפתחים לגדול בו.

צמיחה זו מתרחשת ללא הגבלה; מסיבה זו היא אינה סלקטיבית. עם זאת, אם תרכובות מתווסף בינוני זה למנוע צמיחה של מיקרואורגניזמים מסוימים לטובת הצמיחה של אחרים, הוא הופך להיות סלקטיבי. זה המקרה אם סוגים מסוימים של אנטיביוטיקה או antifungals מתווספים.

כמו כן, אגר דם הוא מדיום ההפרש משום שהיא מאפשרת להבחין בשלושה סוגים של חיידקים: הבטא-המוליטית, אלפא -hemolíticos גמא-המוליטית.

בטא-המוליטית הם אלה שיש את היכולת lyse או לשבור תאי דם אדומים לגמרי, ויוצרים הילה ברור סביב המושבות, ובכך לייצר המוליזה או SS -hemólisis ומיקרואורגניזמים SS נקראים-המוליטית בטא.

דוגמאות של חיידקים ß hemolytic הם סטרפטוקוקוס פיוגנים ו סטרפטוקוקוס אגלאקטיה.

אלפא-המוליטית הוא ביצוע המוליזה חלקית, שבה המוגלובין הוא מתחמצן ל methemoglobin, הפקת צבע ירקרק סביב המושבות. תופעה זו ידועה כמו המוליזה α או α המוליזה ואת החיידקים מסווגים α-hemolytic.

דוגמה של חיידקים α-hemolytic הם סטרפטוקוקוס דלקת ריאות ו סטרפטוקוקוס של הקבוצה וירידנים.

לבסוף, ישנם חיידקים הנקראים גמא- hemolytic או לא hemolytic. אלה לגדול על אגר מבלי לייצר שינויים על זה, אפקט המכונה γ- המוליזה, ואת מיקרואורגניזמים הם γ-Hemolytic.

דוגמה של חיידקים γ-Hemolytic: כמה זנים של סטרפטוקוקוס של קבוצת D (Streptococcus bovis ו- Enterococcus faecalis).

שימושים

אגר דם בינוני בינוני הוא אחד הנפוצים ביותר במעבדה מיקרוביולוגיה.

בין מיקרואורגניזמים המסוגלים הגוברת בדם בינוני אגר הם: חיידקים אירוביים קפדנית, פקולטטיביים, microaerophilic, אנאירובי, גראם חיובי או חיידקים גרם-שליליים גדל במהירות או הגדלים לאט.

כמה חיידקים כי הם תובעניים או מטרידים מנקודת מבט תזונתיים, כמו גם פטריות ושמרים, גם לגדול. כמו כן, זה שימושי עבור תת או להפעיל מחדש את הזנים כי הם חלשים מאוד מטבולית.

עם זאת, הבחירה של בסיס הדם אגר ו תשתנה בהתאם מיקרואורגניזם חשד סביר לשחזר ושימוש שייתן לצלחת (התרבות או antibiogram).

בחירה של סוג הדם

הדם יכול להיות כבש, ארנב, סוס או אדם.

מומלץ ביותר הוא דם טלה, עם כמה חריגים. לדוגמא, כדי לבודד מינים המופילוס, שם הדם מומלץ סוס או ארנב, מאז דם כבשים בעל אנזימים מעכבים גורם V.

המעט המומלץ הוא האדם, אולם הוא משמש ביותר, אולי כי זה הכי קל להשיג. 

הדם חייב להיות defibrinated, שהושג ללא כל סוג של תוסף מחיות בריאים. לשימוש בדם האנושי, יש לזכור מספר גורמים:

אם הדם מגיע מאנשים שסבלו מזיהומים חיידקיים, יהיו להם נוגדנים ספציפיים. בתנאים אלה, הצמיחה של כמה חיידקים עשוי להיות מעוכב.

אם הוא מתקבל מבנק הדם, הוא מכיל ציטראט ואפשר שחיידקים מסוימים אינם מתפתחים בנוכחותו. מצד שני, אם הדם מגיע מחולים הנוטלים אנטיביוטיקה, הגידול של חיידקים רגישים יכול להיות מעוכב.

ואם הדם הוא מאדם הסוכרתי, עודף הגלוקוז מפריע להתפתחות נכונה של דפוסי המוליזה.

בחירה של סוג אגר הבסיס

אגר הבסיס המשמש להכנת אגר הדם יכול להיות רחב מאוד. ביניהם הם: אגר מזין, אגר עירוי הלב המוח, אגר סויה trypticase, אגר מולר הינטון, אגר תאייר מרטין, אגר קולומביה, אגר Brucella, אגר קמפילובקטר, וכו '.

שימושים של אגר דם על פי מדיום הבסיס המשמש להכנתו

אגר מזין

בסיס זה הוא הפחות בשימוש, כי על זה יגדל בעיקר חיידקים לא תובעניים, כגון bacilli אנטיק, Pseudomonas sp, ס אאורוס, באסילוס sp, בין היתר. זה לא מומלץ לבודד סטרפטוקוקוס.

הלב הלב עירוי Agar (BHI)

זהו אחד המשמשים ביותר כבסיס של אגר דם, כי יש לו את החומרים המזינים הדרושים לצמיחה של רוב החיידקים, כולל סטרפטוקוקוס ו חיידקים תובעניים אחרים. למרות שזה לא מתאים להתבונן דפוסי המוליזה.

דם טלה משמש בדרך כלל עם הבסיס הזה.

גרסאות אגר דם יכול להיות גם מוכן, שבו תרכובות אחרות מתווספים לבודד מיקרואורגניזמים מסוימים. לדוגמה, אגר עירוי לב במוח בתוספת דם ארנב, ציסטין וגלוקוזה, משמש לבידוד פרנסיסלה טולרנסיס.

והואיל, עם telurite ציסטין שימושי לבידוד של Corynebacterium diphteriae. אתה יכול להשתמש בדם אדם או טלה.

עם הראשון המוטוליזה ביתא ייראה כמו הילה צרה, ואילו עם השני ההילה יהיה הרבה יותר רחב.

כמו כן, הבסיס הזה עם Bacitracin, עמילן תירס, דם סוס והעשרת תוספים אחר (IsoVitaleX), משמש לבידוד תרמי של הסוג המופילוס מדגימות נשימה.

כמו כן, אם מתווסף שילוב של chloramphenicol אנטיביוטיקה - גנטמיצין או פניצילין - דם סוס סטרפטומיצין, הוא אידיאלי עבור בידוד של פטריות פתוגניות תובעניות, אפילו ביצועים מעולים אגר גלוקוז Sabouraud. זה שימושי במיוחד בבידוד של Histoplasma capsulatum.

סויה טריפטית

בסיס זה הוא המומלץ ביותר עבור תצפית טובה יותר של תבנית המוליזה ואת הביצועים של בדיקות אבחון כגון מוניות של optoquine ו bacitracin. זהו אגר הדם הקלאסי המשמש באופן שגרתי.

עם בסיס זה אתה יכול גם להכין את אגר הדם מיוחד עבור Corynebacterium diphteriae, עם ציסטוריום ציסטין ו דם של כבש.

כמו כן, השילוב של אגר זה עם טלה דם פלוס kanamycin-vancomycin אידיאלי לצמיחה של anaerobes, במיוחד Bacteroides sp.

אגר מילר הינטון

בסיס זה בתוספת דם משמש לביצוע אנטיביוגרפיה של ביקוש מיקרואורגניזמים, כגון סטרפטוקוקוס.

זה גם שימושי לבידוד של חיידקים כמו ליגונלה פנאומפיליה.

אגר טאייר מרטין

מדיום זה הוא אידיאלי כבסיס לאגר דם כאשר הסוג Neisseria נחשד, במיוחד נייסריה מאניטיטידיס, מאז N. gonorrhoeae אינו גדל על אגר דם.

זה גם משמש לביצוע בדיקות רגישות נייסריה מאניטיטידיס.

אגר קולומביה

בסיס זה מצוין עבור זריעת דגימות של ביופסיות קיבה בחיפוש הליקובקטר פילורי.

המדיום הוכן על ידי הוספת דם כבשים 7% defibrinated עם אנטיביוטיקה (ונקומיצין, וסרימתופרים אמפוםרצין B ו- cefsulodin) להגביל את הצמיחה של חיידקים אחרים שעשויים להיות נוכח.

זה הבסיס אותו בתוספת דם האדם או טלה, nalidixic חומצה ו colistin שימושי לבידוד Gardnerella vaginalis. זה גם אידיאלי להערכת רגישות מיקרוביאלית לאנטיביוטיקה של מיקרואורגניזם אותו.

בנוסף, הוא משמש להכנת אגר דם לטיפוח anaerobes, הוספת aminoglycosides ו vancomycin.

בסיס זה מאפשר לנו לבחון כראוי את דפוסי המוליזה.

ברוסלה אגר

מדיום זה משמש כבסיס של אגר דם יחד עם תוספת של ויטמין K אידיאלי לטיפוח חיידקים אנאירוביים. במקרה זה מומלץ להשתמש בדם טלה.

קמילובאקטאר אגר

אגר בתוספת קמפילובקטר עם 5% כבשים דם וחמישה אנטיביוטיקה (cephalothin אמפוםרצין B, וסרימתופרים, B polymyxin ו ונקומיצין), הוא המדיום המשמש לבודד קמפילובקטר ג'אג'וני בדגימות צואה.

הכנה

כל בית מסחרי מביא לחלק האחורי של החבילה את ההוראות להכנת ליטר של המדיום תרבות. החישובים המתאימים ניתן להכין את הכמות הרצויה, על פי אגר הבסיס שנבחר.

לשקול ולהמיס

אגר הבסיס מגיע מיובש (אבקה), ולכן זה חייב להיות מומס במים מזוקקים מותאם pH 7.3.

הסכום שצוין על ידי אגר הבסיס הנבחר הוא שקל ו מומס בכמות המקבילה של מים ב Fiola, ולאחר מכן מחומם לחום מתון מעורבב עם תנועות מסתובב עד כל אבקה מומס..

לעקר

לאחר מומס, לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.

צבירת דם

כאשר עוזב את החיטוי לתת פיולה להתקרר עד הטמפרטורה נדנדה בין 40 ל 50 מעלות צלזיוס; היא טמפרטורה העור האנושי תומך בו זמנית אגר עדיין לא התגבש.

בשביל זה, Fiola נגע ביד ואם החום נסבל, זה הטמפרטורה האידיאלית להוסיף את הכמות המקבילה של דם defibrinated (50 מ"ל לליטר אגר). מערבבים בעדינות להומוגניזציה.

המעבר של צבירה של הדם הוא קריטי, כי אם זה נעשה כאשר המדיום הוא חם מאוד את כדוריות הדם האדומות ישברו את המדיום לא ישמש להתבונן המוליזה.

אם הוא הוסיף קר מדי, גושים יהוו את פני השטח של המדיום לא יהיה חלק לעשות את החליל כראוי.

יוצקים לתוך צלחות פטרי

מגישים בצלחות פטרי סטרילי מיד לאחר homogenizing את הדם. כ 20 מ"ל הוא שפך לתוך כל צלחת פטרי. הליך זה מבוצע על מכסה המנוע זרימה למינרית או ליד המצית.

כאשר משרתים את אגר הדם בצלחות פטרי, אין בועות אוויר צריך להישאר על פני השטח של הצלחת. אם זה קורה, הלהבה של מבער Bunsen מועבר במהירות על הצלחת כדי לחסל אותם..

הצלחות מותר לחזק ולאחסן במקרר (2-8 מעלות צלזיוס) הפוך עד בשימוש. לפני השימוש בלוחות אגר הדם צריך להיות מזג (לתת להם לקחת טמפרטורת החדר) להיות נזרע.

הצלחות המוכנות נמשכות כשבוע.

הפניות

1. Bayona מ 'תנאים מיקרוביולוגיים לעיבוד הליקובקטר פילורי. Rev Col Gastroenterol 2013; (2): 94-99
2. García P, Paredes F, פרננדז דל באריו מ. (1994). מיקרוביולוגיה קלינית מעשית. אוניברסיטת קדיז, מהדורה שנייה. שירות פרסומי UCA.
3. "דם אגר". ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. 10 דצמבר 2018, 14:55 UTC. Dec 27 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. ארגנטינה Panamericana S.A העריכה.
5. CEDIVET מרכז אבחון וטרינרי. גואטמלה זמין בכתובת: trensa.com.
6.  Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. (מהד 'ה -5). ארגנטינה, עריכה Panamericana S.A..