אגר מ.ר. יסוד, הכנה ושימושים



ה אגר M.. הוא בינוני סלקטיבי תרבות מוצק, המשמש לבידוד וספירה של חיידקים חומצה לקטית, במיוחד של Lactobacillus הסוג. אגר זה נוצר בשנת 1960 על ידי אדם, Rogosa ו שארפ, באמצע הנושא את אותו שם, אבל בשל המורכבות שלה הקיצור M.R.S משמש לעתים קרובות..

הוא מורכב peptone proteose, תמצית בשר, תמצית שמרים, סוכר, monooleate sorbitan, פוספט dipotassium, אצטט נתרן, ציטרט אמוניום, מגנזיום סולפט, סולפט מנגן אגר.

הרכב זה מאפשר התפתחות נאותה של חיידקי חומצה לקטית מדגימות קליניות, כגון צואה, הפרשת הנרתיק, דגימות אוראליות וחלב אם, כמו גם מוצרי חלב ובשר..

זה לא משמש באופן שגרתי במעבדות קליניות, כי חיידקים חומצה לקטית מעורבים רק לעתים נדירות בתהליכים פתולוגיים. עם זאת, השימוש אגר M. הוא שכיח יותר בתחום המיקרוביולוגיה של מזון..

מצד שני, מדיום זה משמש כמה מרכזי מחקר שמטרתם מחקר של חיידקים חומצה לקטית.

אינדקס

  • 1 קרן
  • 2 הכנה
  • 3 שימושים
    • 3.1 מאפייני המושבות
    • 3.2 בידוד של חיידקי חומצה לקטית
    • 3.3 ספירת חיידקי חומצה לקטית
    • 3.4 ברמת המחקר
  • 4 בקרת איכות
  • 5 הפניות

קרן

אגר האדם, Rogosa ו שארפ יש קומפלקס מורכב למדי. על ידי פירוק הפונקציה כי כל מרכיביו למלא, הבסיס שלה ניתן להסביר.

פרוטאוז פפטון, תמצית בשר, תמצית שמרים גלוקוז הם חומרים מזינים המספקים את המקור של פחמן, חנקן, ויטמינים ומינרלים הדרושים לצמיחה בקטריאלית. בנוסף, גלוקוז הוא מקור האנרגיה האוניברסלי המשמש ברוב אמצעי התקשורת.

יתר על כן, על מנת לקדם את הצמיחה של חיידקי חומצה לקטית, יש צורך בנוכחות של קו-פקטורים (קטיונים) ההכרחית במטבוליזם של לקטובצילוס וחיידקים הקשורים; תרכובות אלה הם נתרן, מגנזיום ומנגן.

כמו כן, sorbitan monoleate או polysorbate 80 הם מקור חשוב של חומצות שומן כאשר נספג כמו חומרי הזנה.

בנוסף, sorbitan monolate ו אמוניום ציטראט לפעול על ידי עיכוב ההתפתחות של הצומח הנלווה, במיוחד חיידקים שלילי גראם, מתן אופי סלקטיבי של אגר זה.

לבסוף, אגר אגר הוא מה שנותן את עקביות מוצק בינוני.

ישנן גרסאות אחרות של אגר האדם Rogosa שארפ; אחד הוא השלים עם ציסטאין (M.R.S.c), שימושי לבידוד bifidobacteria, בין מיקרואורגניזמים אחרים. יתר על כן, יש המדיום MRS בתוספת נאומיצין, paromomycin, חומצה nalidixic כלוריד ליתיום, במיוחד עבור הספירה סלקטיבית של bifidobacteria במוצרי חלב.

הכנה

לשקול 68.25 גרם של המדיום מיובש להתמוסס ליטר אחד של מים מזוקקים. תנו לעמוד במשך 5 דקות. כדי להמיס בשלמותו, להביא למקור חום מערבבים לעתים קרובות ולתת להרתיחה במשך 1-2 דקות. לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

כאשר עוזבים את החיטוי לתת לעמוד כמה דקות ולהפיץ עדיין חם בצלחות פטרי סטרילי.

אפשר לחזק ולהפוך את הצלחות, להזמין ב plaquers ולאחסן במקרר עד לשימוש. אפשר צלחות לקחת טמפרטורת החדר לפני השימוש בהם.

ה- pH של המדיום צריך להיות 6.4 ± 0.2. כמה בתים מסחריים ממליצים pH בין 5.5 ל 5.9.

המדיום המיובש הוא בז 'ומוכן הוא כהה כהה.

גם בינוני מיובש הצלחות מוכן צריך להיות מאוחסן על 2 עד 8 מעלות צלזיוס.

שימושים

צלחות אגר M.R.S. הם יכולים להיות נזרעים על פני השטח (תשישות או עם מרית של דריגלסקי). זה יכול להיות גם נזרע על ידי עומק. צלחות צריך להיות מודגרות על 37 מעלות צלזיוס ב microaerophilic (4% O2 ו 5-10% של CO2) למשך 24 עד 72 שעות.

שיטת הזריעה נבחרת על פי המטרה המבוקשת (בידוד או ספירה).

מאפייני המושבות

המושבות המשוערות של לקטובצילוס גדלות לבנבן ויש להן מראה רירי או שמנת על אגר זה. אז הם חייבים לזהות.

בידוד של חיידקי חומצה לקטית

לשם כך, נטיעת פני השטח משמש. הדגימות לנטוע דורשות הליך קודם. 

במקרה של דגימות חלב אם, מומלץ לצנטריפוגה 1 מ"ל של המדגם ב 14,000 rmp במשך 10 דקות, על מנת להסיר את השכבה השומנית. 900 μl נמחקים, ב 100 μl הנותר המשקע מושעה ושופכה על מ.ר. אז זה חייב להיות מחולק באופן שווה עם מרית של דריגלסקי.

במקרה של דגימות צואה, אחד (1) גרם של צואה הוא שקל ו homogenized ב 9 מ"ל של 0.1% מים סטריליים peptonated, המקביל דילול 1/10. ואז דילולים סדרתי נעשים, עד דילול הסופי של 10 מתקבל-4.

לבסוף, 100 μl של דילולים 10 נלקחים-2, 10-3 ו -10-4 וכל דילול הוא זרע על אגר MRS, הפצה אחידה עם מרית Drigalski.

ספירת חיידקי חומצה לקטית

במקרה זה זריעת נעשית על ידי עומק.

עבור דגימות של חלב אם, לקחת 1 מ"ל ומניחים אותו צינור פלסטיק חרוטי סטרילי. MRS אגר נוסף בטמפרטורה של כ 40 מעלות צלזיוס עד נפח סופי של 25 מ"ל, קבלת תערובת הומוגנית. לאחר מכן, הוא שפך לתוך צלחות פטרי סטרילית באופן אחיד מותר לעמוד עד שזה polymerizes..

דילולים מיוצרים עבור דגימות צואה, כמתואר לעיל. קח 1 מ"ל של דילול כל מקום צינורות סטרילי חרוטי סטרילי. אגר Mens אגר נוסף נפח של 25 מ"ל.

תערובת של כל דילול הוא שפך אחיד לתוך מנות סטרילי פטרי. לבסוף לתת לזה לעמוד עד פילמור שלה.

ברמת המחקר

בכל יום המחקר של חיידקים חומצה לקטית הופך להיות מעניין יותר; במיוחד החוקרים מבקשים לדעת זנים חדשים ואת הפוטנציאל שלהם כמו ייזום תסיסים סטנדרטיזציה בייצור של מוצרי חלב, בין שימושים אחרים.

במובן זה, Alvarado et al. (2007) השתמשו אגר M. כדי לבצע מחקר שבו הם מבודדים, זיהו ולאפיין חיידקים חומצה לקטית נוכח גבינה מעושנת ונצואלה.

בשנת הגבינה מצאו נוכחות של חיידקים של סוגי Lactococcus ו לקטובצילוס, והגעתי למסקנה כי תערובות הבידודים מתאימות כמו זני Starter בייצור גבינות מחלב מפוסטר.

מאידך, סאנצ'ס ואח '. (2017) השתמשו אגר M. כדי לחקור את נוכחותם של חיידקי חומצה לקטית במערכת העיכול של חזירונים, כדי להשתמש בהם פרוביוטיקה יליד כי להגביר את הפרודוקטיביות של חזירונים בריאים.

במדיום זה הצליחו לבודד ארבעה מינים: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, אנטוקוקוס hirae ו פדיוקוקוס pentosaceus.

כמו כן, Báez et al. (2019) השתמשו אגר M. כדי להעריך חיידקי חומצה לקטית (BAL) ו bifidobacteria עם פוטנציאל פרוביוטי בחלב אם וצואה של תינוקות.

הם הצליחו לבודד 11 BAL ו 3 Bifidobacteria sp ב חלב אם, 8 BAL ו 2 Bifidobacteria sp. בצואה כולם נפגשו פרמטרים מסוימים כי הסמכה אותם כמו חיידקים עם פעילות פרוביוטית.

החוקרים הגיעו למסקנה כי הן חלב אם והן צואה של תינוקות יונקים בלבד משמשים כמקור טבעי לחיידקים פרוביוטיים.

בקרת איכות

כדי להעריך את האיכות של M. זנים שליטה ניתן להשתמש כגון:

תסמונת לקטובצילוס ATCC 9338, לקטובצילוס 393, ביפידובקטריום ביפידום ATCC 11863, Lactobacillus Plantarum ח"כ 8014, לקטובצילוס לקטיס 19435, פדיוקוקוס דמנוסוס 29358, Escherichia coli ו- Bacillus cereus.

התוצאות הצפויות הן צמיחה משביעת רצון עבור 6 החיידקים הראשונים, בעוד E. coli ו Bacillus cereus חייב להיות מעוכב בשלמותו.

הפניות

  1. אלברדו C, צ'אקון Z, Otoniel J, גרר B, בידוד לופז G., זיהוי ואפיון חיידקי חומצה לקטית של גבינה ונצואלה Artisan המעושן Andino. השימוש שלה כמו טיפוח Starter. מדען (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. זמין ב: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, בידוד Alfaro של חיידקים חומצה לקטית מן העיכול של חזירון. L מפעל הווטרינר. פרו 2017; 28 (3): 730-736. זמין ב: scielo.org.
  3. באאז E, גונזלס G, הרננדז G, לופז E, מגה M. הערכה חיידקי חומצה לקטית ו bifidobacteria עם פוטנציאל פרוביוטיים שד צואת חלב לתינוק בעיר אסבדו, מירנדה 2017. העבודה תואר לתואר בוגר ביואנליזה אוניברסיטת Carabobo, ונצואלה.
  4. המעבדה הבריטית אגר א. 2015. זמין ב: britanialab.com
  5. תורמים ויקיפדיה. MRS אגר ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. 10 בינואר 2018, 19:44 UTC. זמין ב: wikipedia.org Accessed February 17, 2019.
  6. רוי ד 'מדיה לבידוד ו ספירה של bifidobacteria במוצרי חלב. Int J מזון Microbiol, 2828 69 (3): 167-82.