אגר LIA (ליזין ברזל) יסוד, הכנה ומשתמש

ה אריה LIA (ליזין ברזל) הוא מבחן ביוכימי המשמש לזיהוי חיידקים של Enterobacteriaceae המשפחה. המדיום הזה נוצר על ידי אדוארדס ופייף, על פי הנוסחה של פלקוב.

במקור הבדיקה היתה מרק המכיל peptones, שמרים לחלץ, גלוקוז, L- ליזין, bromocresol סגול ומים מזוקקים. אדוארדס ופייף הוסיפו אגר אגר, ציטראט אמוניום פריק ונתרן תיוספולאט.

הבדיקה מבוצעת בעיקרה על מנת להדגים את נוכחותו של האנזים ליסין דקרבוקסילאז, המסוגל להגיב עם קבוצת carboxyl של חומצת האמינו L-lysine. Deamination של חומצת אמינו יכול להתרחש גם בשל נוכחותו של האנזים ליזין deaminase.

בנוסף, הרכב המדיום מאפשר להדגים את היכולת של כמה חיידקים חיידקים לייצר מימן גופרתי. לבסוף, ניתן גם לצפות בדור או לא של גז באמצע.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 פפטונים ותמצית שמרים
  • 1.2 גלוקוז
  • 1.3 L- ליזין
  • מחוון pH 1.4 (סגול bromocresol)
  • 1.5 אמוניום חומצה ציטרט ונתרן thiosulfate
• 2 פרשנות המבחן
  • 2.1 דקרבוקסילציה של ליזין
  • 2.2 ניוון ליזין
  • 2.3 ייצור מימן גופרתי (H2S)
• 3 שיא התוצאות
• 4 הכנה
• 5 שימושים
• 6 הפניות

קרן

פפטונים ותמציות שמרים

כמו רוב התקשורת תרבות, אגר ברזל ליזין מכיל רכיבים המספקים את המקור של חומרים מזינים הדרושים לצמיחה חיידקית. רכיבים אלה מיוצגים על ידי peptones ואת שמרים לחלץ.

גלוקוז

כמו כן, אגר זה מכיל גלוקוז פחמימות תוססת. זה ידוע כי כל החיידקים של המשפחה Enterobacteriaceae תסיס גלוקוז.

צעד זה הוא קריטי, כי זה יהיה אחראי על החמצה המדיום, תנאי הכרחי עבור אנזים ליזין decarboxylase, אם קיים, לפעול על המצע שלה.

בחלק מהחיידקים החיידקים, ניתן לראות את ייצור הגז עקב התסיסה של גלוקוז.

הגז הוא הוכיח כאשר יש עקירה של אגר בצינור, משאיר חלל ריק בתחתית הצינור, או על ידי שבר את המדיום בשתי מנות או יותר.

L- ליזין

לאחר ליזין הוא decarboxylated, דיאמין (cadaverine) ופחמן דו חמצני נוצרים.

דקרבוקילציה מתרחשת בנוכחות של פוספט pyridoxal קואנזים. תגובה זו היא בלתי הפיכה.

מחוון PH (סגול bromocresol)

כל השינויים של ה- pH התרחשו במדיום על ידי תגובות שונות, מזוהים על ידי מחוון pH pokocresol pH סגול.

במובן זה, כאשר יש חומציות המדיום הופך צהוב, וכאשר יש אלקליזציה המדיום חוזר צבע סגול או סגול המקורי.

כאשר deamination של ליזין מתרחשת על ידי נוכחות של deasease אנזים ליזין, צורות צבע אדמדם על פני השטח, אופייני פרוטה פרוטה, Providencia וכמה מינים של מורגנלה.

זאת בשל העובדה כי במהלך תהליך של deamination alpha-keto-carbonic חומצה נוצרת, אשר מגיב עם ציטרט אמוניום בנוכחות חמצן, אשר גורם צבע הנ"ל.

אמוניום ציטראט ציטרט ונתרן thiosulfate

מצד שני, חיידקים המייצרים מימן גופרתי יהיה עדות על ידי נוכחות של thiosulfate נתרן (מקור של גופרית) ו ציטרט אמוניום פריק, אשר היזם של H₂S.

חיידקים בעלי אנזים Reducase thiosulfate יש את היכולת לפעול על ידי הקטנת הנוכחי thiosulfate נתרן, להרכיב סולפיט ומימן גופרתי (H₂S).

זה האחרון הוא גז חסר צבע, אבל כאשר הוא מגיב עם מלח ברזל צורות גופרית מתכתית מתכתי, שהוא תרכובת מסיס (ראיה שחורה גלוי).

עם זאת, את היכולת של היווצרות H₂S עם המדיום הזה הוא לא מאוד אמין, כי כמה חיידקים שליליים decarboxylase ליזין מסוגל לייצר H₂S לא יהווה את המשקע השחור, משום שהחומציות של המדיום מתערבת. לכן מומלץ לבדוק עם אמצעים אחרים המכילים ברזל.

פרשנות המבחן

דקרבוקילציה של ליזין

צינורות יש לקרוא לאחר סוף 24 שעות של הדגירה, אחרת יש סיכון של misinterpreting את התגובה, דיווח שליליות שווא.

יש לזכור כי התגובה הראשונה שתתרחש תהיה התסיסה של גלוקוז, ולכן כל הצינורות לאחר 10 עד 12 שעות יהפוך צהוב.

אם בסוף תקופת הדגירה (24 שעות) נצפתה רקע צהוב עם משטח סגול או סגול, התגובה היא שלילית. צבע סגול של פני השטח מתאים אלקליניזציה של המדיום על ידי שימוש של פפטונים.

תגובה חיובית היא אחת שבה התחתון ואת פני השטח של הצינור הם סגולים לחלוטין, כלומר, הוא חוזר אל הצבע המקורי.

לכן, מי קובע את החיוביות של הבדיקה הוא הבסיס או התחתון של המדיום. אם יש לך ספקות לגבי הצבע, אתה יכול להשוות את זה עם צינור לא מחוסן LIA.

סילוק ליזין

צינור המציג את הדמינציה של ליזין יהיה משטח חום אדמדם רקע צהוב (חומצה), או את כל צינור חום אדמדם..

תגובה זו מתפרשת כשלילית עבור decarboxylation של ליזין, אבל חיובי עבור deamination של ליזין.

תגובה זו מוגדרת ומפרשת את שפוע.

ייצור מימן גופרתי (H₂S)

תגובה חיובית היא נצפתה על ידי המראה של משקע שחור בכל או חלק של המדיום. בדרך כלל בין הגבול שפוע לבסיס.

אם המשקע מתרחש בכל הצינור, הוא לא יציג את התגובות האחרות המתרחשות במדיום.

שיא התוצאות

כאשר מפרשים את הבדיקה התוצאות נרשמות כדלקמן:

ראשית לקרוא את שפוע, ואז התחתון או טאקו, ולאחר מכן את הייצור של H₂S, ולבסוף הפקת גז.

דוגמה: K / A + (-). משמעות הדבר:

• K: מסגרת אלקליין (סגול)
• A: חומצה (צהוב) רקע, כלומר, תגובה decarboxylation שלילית ו deamination שלילי.
• +ייצור מימן גופרתי
• (-): ללא גז.

הכנה

שוקל 35 גרם של ברזל אגר ליזין אדים להתמוסס ליטר אחד של מים מזוקקים.

מחממים עד אגר הוא מומס לחלוטין, כך להרתיח אותו לרגע מערבולת לעתים קרובות. הפץ 4 מ"ל של המדיום 13/100 מבחנות עם מכסה כותנה.

לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. הסר מן החיטוי לאפשר לנוח בצורה משופעת, באופן כזה שיש בסיס עמוק ו שפוע קצר.

חנות במקרר 2-8 ° C. אפשר למזג לפני שתילת זן חיידקי.

צבעו של המדיום המיובש הוא בצבע בז 'בינוני ואדמדם מוכן.

ה- pH הסופי של המדיום מוכן הוא 6.7 ± 0.2.

המדיום הופך צהוב עם pH שווה או פחות מ 5.2, וסגול ב pH 6.5 מעלה.

שימושים

בדיקה זו, יחד עם בדיקות ביוכימיות אחרות, משמש לזיהוי bacilli מן Enterobacteriaceae המשפחה..

המדיום הוא נזרע עם לולאה ישר או מחט, אחד או שני אגרופים עשויים לתחתית הצינור, ולאחר מכן את פני השטח של המדיום הוא זיגזג.

זה מודגר במשך 24 שעות ב 35-37 מעלות צלזיוס ב Aerobiosis. אם יש צורך היא נשארת incubating במשך 24 שעות יותר.

זה שימושי בעיקר כדי להבדיל מינים Citrobacter שלילי לקטוז מ Salmonellas sp.

הפניות

1. Mac Faddin ג 'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית. עריכה פנמריקנה. בואנוס איירס ארגנטינה.
2. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
3. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
4. מעבדות בריטניה. אגר ברזל ליזין. 2015. זמין ב: britanialab.com
5. מעבדות BD BBL ליזין ברזל אגר Slants. 2007. זמין בכתובת: bd.com
6. מעבדות ואלטק בינונית L.I.A. 2009. זמין ב: andinamedica.com