שתף:
קרן אגר אנדו, הכנה ושימוש
ה Endo אגר או בינוני Endo הוא מוצק, בינוני תרבות דיפרנציאלית עם מידה מסוימת של סלקטיביות. הנוסחה המקורית נוצרה על ידי Endo בשנת 1904 כדי להבדיל חיידקים לקטוז תסיסה מן החיידקים שאינם מותסס. בהתחלה זה נועד לבידוד של סלמונלה טיפי, אבל מאוחר יותר המטרה של המדיום פנתה לחיפוש אחר קוליפורמים.
העיקרון של אגר אנדו נשאר, אבל הפיתוח שלה עבר שינויים רבים במהלך השנים. נכון לעכשיו, המדיום מורכב Digest פפטי של רקמה חיה, לקטוז, פוספט מימן dipotassium, סולפיט נתרן, fuchsin בסיסי אגר.
השימוש העיקרי של המדיום נקשר לבידוד והבחנה של גראם שלילי bacilli השייכים למשפחה Enterobacteriaceae ולמשפחות אחרות בקרבת מקום..
לונג שימש לגילוי קוליפורמים בדגימות מים, מזון ומוצרי חלב, אבל עכשיו עברה באמצעות פונקציות דומות אחרות המדיום הזה. עם זאת, כמה מעבדות מיקרוביולוגיה להשתמש אגר זה לבידוד תרמי של Enterobacteriaceae מ דגימות קליניות.
אינדקס
- 1 קרן
- 2 הכנה
- 2.1 Endo אגר
- 2.2 משתנה של אגר מ - אנדו
- 3 השתמש
- 4 בקרת איכות
- 5 מגבלות
- 6 הפניות
קרן
Endo אגר מכיל peptones המשמשים מקור של חומצות אמינו, חנקן, פחמן ואנרגיה, הכרחי לצמיחה של מיקרואורגניזמים תובעני.
מצד שני, אופי סלקטיבי מעט של אגר מסופק על ידי תוספת של sulfium sulfite ו fuchsin בסיסי; שני המרכיבים מעכבים באופן חלקי או מלא את התפתחותם של רוב החיידקים החיוניים לחיידקי הגראם.
דמות ההפרש ניתנת על ידי הנוכחות של פחמימות להתססה, אשר במקרה זה הוא fuchsin לקטוז והבסיסי, אשר משמש גם אינדיקטור pH.
חיידקים גראם שליליים שגדלים על אגר זה ומסוגלים לקרוס לקטוז יהוו מושבות ורודות חזקות; להיות pathognomonic של Escherichia coli היווצרות מושבות אדומות כהות עם ברק ירוק מתכתי זוהר. זאת בשל הייצור הגבוה של חומצות מהתסיסה של פחמימות.
יש לציין כי המדיום הוא סביב המושבות גם הופך צבע ורוד חזק. בעוד שאינם תסיסה שלילי bacilli של לקטוז טופס מושבות ורוד בהיר דומה בינוני או חסר צבע.
Dipotassium מימן פוספט יתרות ה- pH של המדיום אגר הוא הרכיב המספק את עקביות מוצק.
הכנה
אנדו אגר
שוקל 41.5 גרם של המדיום מיובש להתמוסס 1 ליטר מים מזוקקים. מחממים את התערובת על ידי ערבוב לעתים קרובות עד שיש פירוק מוחלט של המדיום. לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס, בלחץ 15 £, במשך 15 דקות.
בעת הסרת החיטוי, לאפשר להתקרר לטמפרטורה של כ 45-50 מעלות צלזיוס, לנער את התערובת homogenize לפני ההגשה. יוצקים 20 מ"ל לתוך צלחות פטרי סטרילי.
בואו הצלחות לחזק, להפוך ולאחסן בקופסה או לעטוף עם נייר כהה לפני אחסון במקרר. חשוב מאוד להגן על המדיום מוכן מן האור הישיר. מומלץ להתאמן הוא להכין את הסכום המדויק כי יהיה צורך.
אם מאוחסנים במקרר, הצלחות צריך להיות מזג לפני השימוש.
ה- pH של המדיום צריך להיות בין 7.2 ל 7.6 וצבע המדיום מוכן הוא ורוד חיוור..
וריאנט אגר מ - אנדו
גרסה נוספת של אגר אנדו (m-אנדו) בעקבות הנוסחה של מקארתי, דלייני גראסו, המכיל תרכובות יותר והוא משתנה בצורה של הכנה.
גרסה זו מכילה: tryptose לקטוז, האנזים מתעכל קזאין אנזימטי מתעכל של רקמה חיה, נתרן, אשלגן dibasic פוספט, סולפיט הנתרן, תמצית שמרים, monobasic פוספט אשלגן, fuchsin בסיסיים, כלוריד נתרן deoxycholate, סולפט לאוריל נתרן ו אגר.
במקרה זה, אנחנו שוקלים 51 גרם של המדיום מיובש להשעות אותו 1 ליטר מים מזוקקים המכילים 20 מ"ל של אתנול.
מחממים קלות תוך ערבוב עד שהמדיום מתמוסס לחלוטין. לא להתחמם יתר על המידה ולא לעקר ב החיטוי. לאחר תערובת הומוגני, לשרת בצלחות פטרי סטרילית ולאפשר לחזק.
השתמש
בחלק מהמדינות הוא עדיין משמש לספירת קוליפורמים צואתיים וצהריים בדגימות מים ומזון, במיוחד נוכחות של Escherichia coli כמו האינדיקטור העיקרי של זיהום צואה.
M-אנדו אגר מומלץ על ידי האגודה האמריקאית לבריאות הציבור (APHA) לחיטוי תוכניות ניטור ובקרה וטיפול בשפכים, כמו גם בהערכת איכותם של מי שתייה.
השיטה הנפוצה ביותר היא סינון הממברנה, לאחר העשרת המדגם עם מרק סולפט לוריל במשך 2 עד 4 שעות.
זה יכול לשמש גם כתחליף אגר EMB בניתוח מיקרוביולוגיות של מזון ומים עבור טכניקת המספר הסבירה ביותר (NMP), דווקא מאשר שלב השלם כדי לאשש בנוכחות E. coli מ brobids עכירות עכירות.
בקרת איכות
כדי להעריך את האיכות של אצווה מוכן אגר Endo, ידוע או מוסמך זנים בקרה נזרעים.
בין הזנים שניתן להשתמש בהם למטרה זו: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, אנטרוקטור קלואקא ATCC 13047, דלקת ריאות קלבסילה ATCC 13883, סלמונלה טיפימוריום ATCC 14028, שיגלה ATCC 12022, פרוטאוס מיראביליס ATCC 14153 ו אנטוקוקוס פקאליס ATCC 11700.
זנים נזרעים על ידי תשישות מודגרת על 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות ב Aerobiosis.
התוצאות הצפויות הן:
- כדי Escherichia coli: מושבות אדום חזק, עם ברק מתכתי.
- כדי E. cloacae ו ק. דלקת ריאות המושבות צריכות להיות ריקות ורודות.
- במקרה של S. typhimurium, S. flexneri ו פ מיראביליס המושבות הן בדרך כלל ורוד בהיר או חסר צבע.
- לבסוף, E. faecalis זה צפוי להיות מעוכבים חלקית, ולכן הצמיחה שלה צריכה להיות גרועה עם מושבות קטנות מאוד של ורוד חזק.
מגבלות
-המדיום אנדו תחת כוח סלקטיבית לפיכך, יתכן כי הם יכולים לגדול כמה גרם אורגניזמים חיוביים כגון סטפילוקוקוס, אנטרוקוקוס ואפילו שמרים.
-Bacilli אחרים שאינם שייכים למשפחה Enterobacteriaceae יכול להתפתח במדיום זה, למשל Pseudomonas sp ו Aeromonas sp. המאפיינים של זנים אלה הם מושבות לא סדירות בצבע.
-זה בינוני מוכן רגיש מאוד לאור, ולכן, חשיפה ממושכת זה מחמיר את מערכת החיווי, פגיעה בלתי הפיך בינוני.
-המרכיבים של המדיום נחשבים מסרטנים, ולכן יש להימנע ממגע ישיר.
-המדידה המיובשת מאוד היגרוסקופית ויש לשמור אותה במיכל המקורי בטמפרטורת החדר, סגורה היטב ובסביבה יבשה.
הפניות
- מעבדות BD אנדו אגר. 2013. זמין בכתובת: bd.com
- מעבדות Neogen מ 'אנדו אגר. זמין ב: foodsafety.neogen.com
- "אגר אנדו". ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. 7 Sep 2017, 08:27 UTC. 28 פבואר 2019, 22:55. זמין ב: en.wikipedia.
- מעבדת מרק. Endo אגר 2019. זמין ב: merckmillipore.com
- מעבדות גיליון טכני. M-Endo אגר LES. 2015. זמין ב: liofilchem.net