אגר EMB יסוד, הכנה ושימוש

ה אגר EMB הוא סלקטיבי ודיפרנציאלי בינוני בינוני מוצק המשמש לבידוד של bacilli שלילי גראם, בעיקר של משפחת Enterobacteriaceae, אחרים שאינם דורשים bacilli שלילי. זה ידוע גם על ידי ראשי תיבות EAM, כלומר eosin-methylene כחול.

מדיום זה נוצר על ידי הולט האריס ו Teague בשנת 1916. הוא מכיל פפטון, לקטוז, סוכרוז, פוספט dipotassium, אגר, eosin, מתילן כחול ומים. זה דומה מאוד אגר MacConkey, במיוחד אם באמצעות אגר EMB שונה על ידי לוין, אשר אינו מכיל סוכרוז.

למעשה, כל מעבדה מחליטה אם זה עובד עם זה או אחר, שכן הם ממלאים את אותה פונקציה, אם כי ביוכימית הם שונים.

זה אפילו מציג את אותו חיסרון כמו אגר MacConkey קלאסי במונחים של ייצור swarming על ידי פרואוס סוג. לכן, כדי למנוע תופעה זו ניתן להגדיל את ריכוז של אגר עד 5%.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 סלקטיבי
  • 1.2 הפרש
• 2 הכנה
• 3 שימושים
• 4 בקרת איכות
• 5 שיקולים סופיים
• 6 הפניות

קרן

סלקטיבי

אגר EMB הוא סלקטיבי בעדינות משום שהוא מכיל את צבעי anilinic (כחול מתילן eosin), אשר פועלים כמו מעכבי, מניעת צמיחה של רוב חיידקים גראם-חיוביים וחלקם שליליים חיידקים גראם בדרישה.

עם זאת, אגר זה יש את החיסרון כי כמה חיידקים חיוביות גראם יכול להתנגד נוכחות של חומרים מעכבים לגדול כמו מושבות pectctiform קטן חסר צבע, כגון אנטוקוקוס פקאליס וכמה סטפילוקוקוס.

אתה יכול גם לגדל שמרים מסוימים, כגון קנדידה אלביקנס מורכבת, זה ייתן מושבות ורוד קטן מאוד. אפילו chlamydospores ניתן לפתח שמרים אם המדגם הוא נזרע על ידי עומק.

דיפרנציאלי

יתר על כן, אגר EMB הוא גם מדיום ההפרש, שכן צבעים אלה ביחד (כחול מתילן eosin) יש את המאפיין של להרכיב המשקע ב pH חומצי, ולכן הם משמשים אינדיקטורים של הייצור שלה.

לכן, תסיסה חלש לקטוז או סוכרוז חיידקים לייצר מושבות סגולות ב 24 עד 48 שעות. לדוגמה Genera Klebsiella, Enterobacter ו Serratia.

חיידקים אלה התוססים בתוקף לקטוז, כגון Escherichia coli, או סוכרוז, כמו Yersinia enterocolitica o פרוטאוס פנרי, טופס משקע שחור ירקרק, נותן מאפיין ברק מתכתי מינים אלה.

יש לציין כי אם בינוני המדיום EMB משמש (ללא סוכרוז), Yersinia enterocolitica ו פרוטאוס פנרי הם יפיקו מושבות שקופות.

חיידקים לא להתסיס לקטוז או סוכרוז ניזונים על ידי הנוכחות של peptones, מתן חומצות אמינו וחנקן התפתחות חיידקים, ולייצר מושבות שקופות. לדוגמה, סלמונלה ו Shigella Genera, בין היתר.

כמו כן, חשוב לציין כי סוג Acinetobacter עשויה להיות מושבות כחולות לבנדר, אם כי לא פרמנטור לקטוז, סוכרוז או, אבל יש את המאפיין של תיקון הכחול מתילן ב דופן התא שלהם. זה יכול לקרות גם עם חיידקים אחרים חמצון.

הכנה

המדיום המיובש המקורי הוא בז 'בהיר.

כדי להכין את המדיום הזה תרבות, 36 גרם של המדיום מיובש יש לשקול ולהשליך בקבוקון המכיל ליטר אחד של מים מזוקקים.

לאחר שעזב את התערובת במשך 5 דקות במנוחה, להביא את הפולה למקור חום, ערבוב נמרץ כל הזמן עד שהוא רותח והוא מומס לחלוטין..

לאחר מכן, המדיום תרבות מומס חייב להיות מעוקרים באמצעות החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

בסופו של דבר, הוא מוסר מן החיטוי והשאיר לנוח בקצרה. ואז הוא מוגש אפילו חם (45 - 50 מעלות צלזיוס) בין 15 ל 20 מ"ל של אגר בכל צלחת פטרי סטרילי. המדיום צריך להיות לקמוס כחול.

לאחר המשרתים את הצלחות נותרים מעט חשוף עד אגר מתקרר קצת. אז הם מכוסים מותר לגבש לחלוטין. מאוחר יותר, הם מסודרים בתוך רובד הפוכה הפוך מאוחסנים במקרר (8 ° C) עד שהם משמשים.

הליך זה הוא רצוי שבוצעו על מכסה המנוע זרימה למינרית או מול מבער Bunsen, כדי למנוע זיהום.

חשוב לזכור כי כל בית מסחרי יציין את הסכום שיש לשקול כדי להכין את המדיום התרבות.

ה- pH הסופי של המדיום צריך להיות 7.2 ± 0.2

שימושים

מדיום זה משמש לזרוע שתן וצואה או סוג כלשהו של דגימות קליניות, במיוחד אם אתם חושדים נוכחות של חיידקים גראם שליליים תובעני כמו החיידקים השייכים למשפחת Enterobacteriaceae, אשר גדל היטב במדיום הזה.

החיידקים האנתרופאטוגניים של הג'ילה שיגלה וסלמונלה מובחנים על ידי מושבותיהם חסרות הצבע או הענבר הקטן.

אחרים שאינם תסיסה bacilli לקטוס גם לגדול, כגון Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, בין היתר..

כמו כן, המדיום הזה הוא מאוד שימושי בניתוח המיקרוביולוגי של מזון ומים, שכן הוא אידיאלי לשלב המאשר המלא של קביעת קוליפורמים, כלומר, כדי לאמת את הנוכחות של E. coli מ מרקים EC עכביש, מן הטכניקה המספר הסביר ביותר (NMP).

בקרת איכות

כדי לוודא כי המדיום תרבות מעובד החדש עובד היטב, זנים בקרה ניתן לשתול כדי לבחון את המאפיינים של המושבות ולוודא שהם נותנים כצפוי.

לשם כך, זנים ATCC או מזוהים היטב זנים של E. coli, אנטרוקטין, Klebsiella sp, סלמונלה טיפימוריום, שיגלה, Pseudomonas aeruginosa וכמה חיידקים חיוביים גרם, כמו ס 'אאורוס.

זה צפוי כי E. coli ליצור מושבות מפותח שחור כהה עם ברק מתכתי ירוק. כל עוד, אנטרוקטין ו Klebsiella sp הם חייבים לתת מושבות ריריות מפותח היטב כחלחל - שחור.

מצידה, סלמונלה typhimurium ו שיגלה, הם חייבים לפתח מושבות גדולות, חסר צבע או עם צבע ענבר קלה.

לבסוף הז'אנר Pseudomonas aeruginosa זה גדל כמו מושבות חסרות צבע של גודל לא סדיר, בעוד חיידקים חיוביות גראם צריך להיות מעוכב לחלוטין או לגדול במשורה עם מושבות קטנות מאוד.

שיקולים סופיים

לפעמים עיקור גורם מתילן כחול כדי לצמצם, התבוננות בינוני כתום. על מנת methylene כחול לחמצן ואת צבע סגול להתאושש, זה חייב להיות מעורב בעדינות עד צבע משחזרת.

כמו כן, לאחר עיקור יכול להאיץ את הצבע, ולכן זה חייב להיות מעורב היטב לפני ההגשה של צלחות פטרי.

הפניות

1. Camacho A, Giles M, אורטגון A, Palao M, סראנו B ו Velázquez O. 2009. טכניקות לניתוח מיקרוביולוגי של מזונות. מהדורה שנייה. הפקולטה לכימיה, UNAM. מקסיקו.
2. Carranza C, León R, Falcón N, נוימן A, Kromm C. אפיון והפצה של זנים של Escherichia coli פוטנציאל מבודד בודד של דגן עוף של חוות עופות בפרו. L מפעל הווטרינר. פרו 2012 23 (2): 209-219. זמין ב: scielo.org.
3. מעבדות Conda S.A. אוסין אגר ומתילן כחול. 2010. זמין ב: condalab.com
4. מעבדות בריטניה. לוין E.M.B (עם Eosin ו Methylene כחול) 2011. זמין ב: britanialab.com
5. מעבדות BD BD EMB אגר (Eosin מתילן כחול אגר), שונה. 2013. זמין בכתובת: bd.com
6. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. (מהד 'ה -5). ארגנטינה, עריכה Panamericana S.A..
7. פורבס B, סחם D, Weissfeld A. 2009. אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. ארגנטינה Panamericana S.A העריכה