לאגר יש בסיס סטנדרטי, הכנה ושימושים



ה אגר חשבון רגיל זהו מדיום מוצק, הלא סלקטיבי, המיועד כימות של הווה העומס מיקרוביאלי בדגימות מים לצריכה אירובית, שפכים, משקאות חלב, ומזונות אחרים. מדיום זה ידוע גם בשם אגר PCA, על ראשי התיבות שלה באנגלית צלחת אגר אגר. הוא נוצר בשנת 1953 על ידי Buchbinder, באריס וגולדשטיין.

החשבון הממוצע אגר רגיל מורכב תמצית שמרים, טריפטין, גלוקוז, אגר ומים מזוקקים. ניסוח זה מכיל אלמנטים תזונתיים בסיסיים המאפשרים את הפיתוח של עומס מיקרוביאלי הנוכחי, לא תובעני.

כמו המדיום אינו מכיל מעכבים, החיידקים יכולים להתפתח ללא כל הגבלות, ולכן הוא אידיאלי עבור ספירת המושבה הכללית. עם זאת, הטכניקה כימות צלחת לא יזהה את כל החיידקים הנוכחיים, אבל רק אלה המסוגלים לגדול תחת התנאים הסביבתיים שאגר אגר סטנדרטיים כפוף..

הנה, צלחת טכניקת קוונטיזציה מבקשת לקבוע כלל בסכום של חיידקים אירובי סוג mesophilic, כלומר אלה שנערכו בטמפרטורות שבין 25 ו 40 מעלות צלזיוס, עם טמפרטורת צמיחה אופטימלית 37 ° C.

זו קבוצה חיידקית חשוב מאוד, כי יש רוב החיידקים הפתוגניים עבור האדם.

יש לציין כי לפעמים זה עשוי להיות מעניין לכמת את כמות החיידקים פסיכופילי נוכח המזון. חיידקים אלה הם אלה המתפתחים בטמפרטורות נמוכות (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

כמו כן, חיידקים thermophilic, אשר מתפתחים בטווח שבין 50 מעלות צלזיוס ל 80 מעלות צלזיוס או יותר, יכול להיות חשוב סוגים מסוימים של מזונות כגון משומר.

כימות מיקרוביאלית באה לידי ביטוי במושבות להרכיב יחידות (CFU) לכל גרם או מיליליטר של המדגם.

אינדקס

  • 1 קרן
  • 2 הכנה
    • 2.1 עבור צלחת לשפוך את הטכניקה
    • 2.2 לשתילת פני השטח
  • 3 השתמש
    • 3.1 פליטה טכניקה לשפוך (seeded על ידי עומק)
    • 3.2 טכניקה שנזרעה על פני השטח
  • 4 בקרת איכות
  • 5 מגבלות
  • 6 הפניות

קרן

חשבון התקן הממוצע נועד לאפשר פיתוח משביע רצון חיידקים אירוביים nonfastidious כמו תמצית שמרים, trypticase ואת הגלוקוז לספק את החומרים מזינים הדרושים לצמיחת חיידקים טובה.

מצד שני, המדיום בעל צבע בהיר ומראה שקוף, ולכן הוא אידיאלי להצגת המושבות שפותחו על ידי שיטת זריעה עמוקה (שופכת לתוך צלחת).

אפשר גם לספור מושבות על ידי שיטת זריעה על פני השטח עם מרית של דריגלסקי.

כאשר עומס מיקרוביאלי גבוה, דילולים עשרוניים של המדגם תחת המחקר חייב להיעשות על מנת לספור את CFUs.

יש לציין כי בינוני זה מומלץ על ידי האגודה הציבורית לבריאות הציבור (APHA) עבור ספירת mesophiles אירובי.

הכנה

לשקול 23.5 גרם של המדיום מיובש להתמוסס ליטר אחד של מים מזוקקים. כדי להמיס לחלוטין את התערובת חייב להיות מחומם ערבוב לעתים קרובות עד שהוא רותח. השלבים הבאים משנה תלוי טכניקה זריעה לשמש.

לקבלת צלחת לשפוך את הטכניקה

הפץ על ידי חלוקת 12 עד 15 מ"ל לתוך מבחנות. לאחר מכן, לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. אפשר לחזק אנכית בצורה של בלוק. יש לאחסן במקרר עד לשימוש.

ממיסים את הרמז כאשר הוא עומד לשמש. לאחר נמס, לשמור אותו באמבט מים ב 44-47 מעלות צלזיוס תוך דוגמאות מוכנות.

לשתילה על פני השטח

לעקר את המדיום החיטוי על 121 מעלות צלזיוס ולאחר מכן להפיץ 20 מ"ל בצלחת פטרי סטרילי. אפשר לחזק, להפוך ולאחסן במקרר עד לשימוש.

מזג את הצלחות לפני השימוש. ה- pH של המדיום צריך להיות 7.0 ± 0.2.

השתמש

ספירת אגר רגילה משמש טכניקה ספירה mesophil אירובי במהלך הניתוח המיקרוביולוגי של מים ומזון. הספירה של mesophiles אירובי נחוץ, שכן הוא קובע את איכות סניטריים של המדגם תחת מחקר.

היישום של טכניקה זו (באמצעות המדיום הזה) מאפשר הדמיה מקרוסקופית של מושבות מבודדים לכימות שלהם.

טכניקת פלאק לשפוך (seeded על ידי עומק)

-נוהל

הטכניקה מורכבת מהפעולות הבאות:

1) homogenize המדגם על מנת להפיץ מחדש את החיידקים הנוכחי.

2) ההשעייה הראשונית מתבצעת בקבוקון או שקית סטרילית, מכבד את יחס 10 גרם או 10 מ"ל של מדגם 90 מ"ל של diluent (10-1).

3) מן ההשעיה הראשונית דילולים עשרוניים הרלוונטיים נעשים בהתאם לסוג המדגם. דוגמה: (10)-2, 10-3, 10-4). דילולים מיוצרים עם מים פפטון או חיץ פוספט.

כדי לעשות זאת, לקחת 1 מ"ל של ההשעיה הראשונית במקום 9 מ"ל של diluent, להמשיך את דילולים במידת הצורך, לוקח עכשיו 1 מ"ל של דילול.-2 וכן הלאה.

4) קח 1 מ"ל של דילול כל מקום בצלחות פטרי סטרילי ריק.

5) הוסף לכל צלחת 12 עד 15 מ"ל של אגר ספירה רגילה נמס בעבר להגדיר ב 44 - 47 ° C.

6) לתת חלקה תנועות סיבוב צלחות להפיץ את המדגם כדי אגר באופן אחיד ולאפשר לחזק.

7) הפוך צלחות דגירה על 37 מעלות צלזיוס ב Aerobiosis עבור 24 עד 48 שעות.

8) פעם אחת סיימה, להמשיך לבדוק את הצלחות ולספור את המושבות בדילול המאפשר את זה. הוא נבחר עבור ספירת אלה צלחות שיש בין 30 ל 300 CFU.

הספירה יכולה להיעשות באופן ידני או ציוד מונה המושבה ניתן להשתמש.

הערכים המותר לכל מ"ל של המדגם עשויים להשתנות ממדינה אחת לאחרת בהתאם לסטנדרטים שבהם הם כפופים.

-חישוב UFC

החישוב הכללי נעשה באמצעות הנוסחה הבאה:

להביע את התוצאות בספרות 1 או 2, הכפלת הבסיס המתאים 10. דוגמה: אם התוצאה היא 16.545, היא מעוגלת על בסיס הספרה השלישית עד 17.000 והיא תתבטא באופן הבא: 1.7 x 104. עכשיו, אם התוצאה היתה 16,436 מעוגל ל 16,000 והוא מתבטא 1.6 x 104.

טכניקה נטועה על פני השטח

-נוהל

-לחסן עם 0.1 מ"ל של מדגם ישיר אם הוא נוזלי, ההשעיה הראשונית 10-1 או של דילולים רצופים 10-2, 10-3 וכו ', באמצע צלחת אגר חשבון רגיל.

-להפיץ את המדגם באופן שווה עם מרית Drigalski או מוט בצורת L. תן לעמוד במשך 10 דקות.

-הפוך צלחות דגירה ב Aerobiosis ב 37 מעלות צלזיוס למשך 24 עד 48 שעות.

-להמשיך לספור את המושבות, לבחור את הצלחות כי הם בטווח שבין 20 - 250 CFU.

-חישוב UFC

לצורך החישוב, מקדם הדילול מוחל, שהוא הפוך. המספר מעוגל לשתי ספרות משמעותית (מעוגלת פי הספרה השלישית) מתבטאת בשלטון בסיס 10. לדוגמה, אם 224 CFU לספור במדגם ללא דילול (10-1), 22 x 10 הוא דיווח1  UFC, אבל אם הדמות היתה 225 הוא דיווח על 23 x 101 UFC.

עכשיו, אם אתה סופר 199 CFU בדילול 10-3, 20 x 10 יפורסמו4 UFC, אבל אם 153 CFU נספרים בדילול זהה, 15 x 10 ידווח4 UFC.

בקרת איכות

המדידה תקן תרבות ספירה ניתן להעריך באמצעות זנים מוכרים ידועים, כגון: Escherichia coli ATCC 8739, סטפילוקוקוס אאורוס ATCC 6538, באסילוס תת ATCC 6633, תסמונת לקטובצילוס ATCC 9338, סטפילוקוקוס אפידרמידיס ATCC 12228, שיגלה ATCC 12022.

אם המדיום התרבותי הוא בתנאים אופטימליים, צמיחה משביעת רצון צפויה בכל המקרים, למעט L. פרמנטום זה יכול להיות ביצועים קבועים.

כדי להעריך את הסטריליות של המדיום תרבות, אחת או שתי צלחות של כל אצווה מוכן (uninoculated) צריך להיות מודגרות על 37 מעלות צלזיוס ב Aerobiosis במשך 24 שעות. בסוף תקופה זו, אין שינוי צבע או שינוי של המדיום יש לראות..

מגבלות

-לא להמיס את אגר יותר מפעם אחת.

-המדיום מוכן יכול להימשך עד 3 חודשים כל עוד הוא נשמר במקרר מוגן מפני האור.

-מדיום זה אינו מתאים לדרישה מיקרואורגניזמים, ולא אנאירוב.

הפניות

  1. המינהל הלאומי של תרופות מזון וטכנולוגיה רפואית (ANMAT). ניתוח מיקרוביולוגי של מזון, מתודולוגיה אנליטית רשמית, מיקרואורגניזמים מחוונים. 2014 נפח 3. זמין ב: anmat.gov.ar
  2. דיקו פרנסיסקו סוריה מלגיזו מעבדות, ש. צלחת ספירה אגר. 2009. זמין בכתובת: http://f-soria.es
  3. מעבדות קונדה פרונאדיסה. אגר עבור שיטות סטנדרטיות (PCA) על פי APHA ו ISO 4833. זמין ב: condalab.com
  4. מעבדות בריטניה. ספירת על צלחת אגר. 2015. זמין ב: britanialab.com
  5. Camacho A, Giles M, אורטגון A, Palao M, סראנו B ו Velázquez O. 2009. טכניקות לניתוח מיקרוביולוגי של מזונות. מהדורה שנייה. הפקולטה לכימיה, UNAM. מקסיקו זמין בכתובת: