סימונס ציטראט אגר יסוד, הכנה ושימוש

ה סימונס אגר ציטראט זהו מדיום מוצק המשמש כמבחן ביוכימי לזיהוי מיקרואורגניזמים, בעיקר גראם שלילי שלילי. המדיום המקורי נוצר על ידי Koser בשנת 1923.

המדיום של סיטרט של קוסר כלל מרק המכיל פוספט נתרן, פוספט אמוניום, פוספט מונופוטסיום, מגנזיום גופרתי ונתרן ציטראט..

כפי שניתן לראות, מקור הפחמן היחיד במדיום הוא ציטראט, וחנקן הוא פוספט אמוניום, חלבונים ופחמימות שהושמטו כמקור של אלמנטים אלה, הם נוכחים בדרך כלל בתקשורת אחרת..

לכן, החיידק מחוסן כי המדיום יכול רק להתרבות אם הוא מסוגל לקחת את הפחמן ציטראט. המבחן היה חיובי אם יש עכירות במדיום, אבל זה היה החיסרון כי לא ספציפית עכירות יכול להתרחש.

בעיה זו נפתרה על ידי סימונס הוספת אגר וברומותימול כחול לנוסחה המקורית של קוסר. למרות העיקרון הוא זהה, הוא מפרש אחרת.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 מצב זריעה
  • 1.2 פרשנות
• 2 הכנה
• 3 השתמש
• 4 שיקולים סופיים
  • 4.1 מחנק
  • 4.2 זרעים
  • 4.3 עוצמת צבע
• 5 הפניות

קרן

יש כמה חיידקים היכולת לשרוד בהיעדר תסיסה או ייצור חומצה לקטית, צריך ללמוד להסתדר כוח באמצעות מצעים אחרים. במבחן זה המקור היחיד של פחמן המוצע הוא ציטראט.

חיידקים המסוגלים לשרוד בתנאים אלו מטבולים ציטראט במהירות באמצעות חלופה לתוואי המסורתי, תוך שימוש במחזור החומצה הטריקרבוקסילית או במחזור התסיסה של ציטראט.

קטבוליזם של ציטראט על ידי חיידקים כולל מנגנון אנזימטי ללא התערבות של קואנזים A. אנזים זה ידוע בשם citricase (ציטראט oxaloacetate-lyase) או ציטראט desmolase. התגובה דורשת נוכחות של קטיון דו-פעמי, שבמקרה זה מסופק על ידי המגנזיום.

התגובה מייצרת oxaloacetate ו פירובט, אשר לאחר מכן להצמיח חומצות אורגניות במצע pH הבסיסי נוצר על ידי שימוש מקור החנקן. אלה חומצות אורגניות משמשים כמקור פחמן לייצר פחמתי ו bicarbonates, עוד אלקליזציה בינוני.

מצב זריעה

ציטראט סימונס הממוצע צריך להיות מחוסן מעט Fishtail באמצעות Ansa ישר או במחט, וטופח במשך 24 שעות 35-37 ° C. בסוף הזמן התוצאות נצפות.

זרע נעשה רק על פני השטח של אגר. אל תעשה ניקור.

פרשנות

אם המדיום הוא של הצבע המקורי (ירוק) ואין צמיחה נראית לעין, המבחן הוא שלילי, אבל אם המדיום משתנה לכחול, הוא מציין את נוכחותם של מוצרים אלקליין, אשר מזוהה על ידי מחוון pH. במקרה זה המבחן הוא חיובי.

הסיבה לכך היא שאם להשתמש חיידקים ציטראט הפחמן הוא גם מסוגל לקחת חנקן ופוספט אמוניום שבה משחרר אמוניה, alkalizing המדיום.

מצד שני, אם הצמיחה של החיידקים היא נצפתה במדיום, אבל אין שינוי צבע, המבחן צריך להיחשב גם חיובי, שכן אם יש צמיחה זה אומר כי החיידקים היו מסוגלים להשתמש ציטרט כמקור פחמן, אם כי אין שינוי pH כרגע (לפעמים זה עלול לקחת).

אם יש ספק בפרשנות של הצבע הסופי, ניתן להשוות אותו עם צינור של ציטראט uninoculated.

הכנה

שוקלים 24.2 גרם של המדיום המיובש לליטר אחד של מים. מערבבים ולתת לעמוד במשך 5 דקות בערך. מסיים את המדיום על ידי חימום במשך 1 או 2 דקות, תוך ערבוב לעתים קרובות.

לשרת 4 מ"ל של מבחנות חיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. עם יציאת החיטוי, באמצעות סוגר להטות כך אגרתי מבצרת אלכסון בצורה עם רקע קצת טאקו או שיפוע.

PH הסופי של המדיום ציטראט הוא 6.9 (ירוק). המדיום הזה רגיש מאוד לשינויים ב- pH.

ב pH 6 או למטה, המדיום הופך צהוב. צבע זה אינו נצפה במבחן עם חיידקים.

וב- pH 7.6 ומעלה, המדיום משתנה לכחול פרוסי אינטנסיבי.

השתמש

Simarons ציטראט אגר משמש לזיהוי של מיקרואורגניזמים מסוימים, במיוחד bacilli השייכים למשפחה Enterobacteriaceae אחרים bucilli גלוקוז ללא תסיסה..

שיקולים סופיים

המדיטציה סימונס סימטראט הוא מבחן עדין מאוד, כי תוצאות חיוביות שגויות ניתן להשיג אם שגיאות מסוימות נעשות.

הטיפול שיש לנקוט הוא כדלקמן:

מחנק

אל תכניסו חיידק בקטריאלי עבה או טעון, מכיוון שהוא עלול לגרום לצבע צהוב נחושת להתפתח באתר השתילה, מבלי להשפיע על שאר המדיום, אך הוא עלול להוביל לאמונה שיש צמיחה. אין זה אומר חיוביות של הבדיקה.

כמו כן, inoculum עבה יכול ליצור חיובי כוזב, כי תרכובות אורגניות preformed בתוך קירות התא של חיידקים גוסס יכול לשחרר מספיק פחמן וחנקן כדי להפוך את מחוון pH.

לכן, האידיאל הוא לשתול באמצעות המחט במקום הידית פלטינה, כדי למנוע נטילת חומר עודף.

נזרע

מצד שני, כאשר הסוללה של בדיקות ביוכימיות הוא נטוע לזיהוי של מיקרואורגניזם המדובר, חשוב כי הבדיקה ציטראט להיות הראשון להיות מחוסן, כדי למנוע גרירת חלבונים או פחמימות ממדיום אחר.

בנסיבות אלה ניתן להשיג חיוב כוזב, כי כל החומרים האלה שמוצג בטעות יהיה metabolized ולגרום לשינוי ב- pH.

דרך נוספת למנוע את גרור של חומרים היא לשרוף את הידית היטב ולקחת inoculum חדש בין מבחן אחד למשנהו.

יש להקפיד גם כאשר נוגעים המושבה לבצע את inoculum, כמו זה יש להימנע לגרור חלק אגר מן התרבות שממנו באים חיידקים, בשל הסביר בעבר.

במובן זה, Matsen, Sherris ו- Branson ממליצים על דילול המינון בפתרון הפיזיולוגי לפני חיסון בדיקת הציטראט, כדי למנוע העברת מקורות פחמן אחרים.

עוצמת צבע

יש לקחת בחשבון כי עוצמת הצבע המיוצר כאשר הבדיקה חיובית עשויה להשתנות בהתאם לבית המסחרי.

בנוסף, ישנם מיקרואורגניזמים הבדיקה חיובית ב 24 שעות, אבל יש זנים אחרים הדורשים 48 שעות או יותר כדי לייצר שינוי ב- pH.

הפניות

1. Mac Faddin ג 'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית. עריכה פנמריקנה. בואנוס איירס ארגנטינה.
2. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
3. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
4. מעבדות BD ציפורי סיגריות. 2015. זמין ב: bd.com
5. מעבדות בריטניה. צימונס ציטרט אגר. 2015. זמין ב: britanialab.com
6. מעבדות אבחון ואלטק. צימונס ציטרט אגר. 2016. זמין ב: andinamedica.com.