Voges-Proskauer בדיקה בסיס, הכנה ושימושים

ה מבחן Voges-Proskauer הוא מבחן ביוכימי המשמש כדי לסייע לזהות חיידקים השייכים למשפחה Enterobacteriaceae. במיוחד זה שימושי כדי להבדיל זנים של Escherichia coli of Klebsiella ו Enterobacter, בין היתר.

הבדיקה מבוצעת במדיום התרבות הנוזל שנקרא מתיל אדום- Voges Proskauer, הידועה יותר על ידי ראשי תיבות RM / סגן נשיא. מדיום זה מורכב פוליפפטון שנאגרו, גלוקוז, פוספט dipotassium ומים מזוקקים.

המדיום הנוכחי של RM / VP הוא שינוי במדיום קלארק ולובס, שהכיל במקור ריכוז נמוך יותר של פפטונים וגלוקוז. לכן, פחות יון מימן הופק, נדרש לתגובה חיובית Voges-Proskauer.

הבדיקה מבוססת על היכולת של מיקרואורגניזם להשתמש גלוקוז באמצעות גליקול בוטילן ויוצרים מוצר נייטרלי הסופי שנקרא acetoin בנוכחות חמצן ו pH בסיסי.

במדיום RM / VP, בנוסף ליכולת לחשוף את מבחן Voges-Proskauer, ניתן לבחון את הבדיקה האדומה של המתיל.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 הבסיס של מבחן Voges-Proskauer
  • 1.2 הבסיס לפיתוח המבחן והפרשנות
• 2 הכנה
  • 2.1 בינונית / סמנכ"ל
  • 2.2 Voges מגיב
  • 2.3 מגבונים B מגיב
• 3 נוהל מבחן Voges-Proskauer
  • 3.1 פיתוח המבחן
• 4 השתמש
• 5 בקרת איכות
• 6 הפניות

קרן

בסיס מבחן Voges-Proskauer

Pluripeptonas הנוכחי במדיום לספק את הדרישות התזונתיים החיוניים לצמיחה חיידקית. מצידה, גלוקוז הוא המתחם העיקרי. חיידקים רבים יש את היכולת metabolize גלוקוז וחומצה חומצה pyruvic.

חומצה פירובית היא נקודת האמצע של חילוף החומרים של גלוקוז ומשם כל מיקרואורגניזם יכול לקחת מסלולים שונים. חלקם ייצרו חומצות מעורבות, כגון חומצה לקטית, חומצה אצטית, חומצה פורמית וחומצה סוצ'ניקית, ואחרים ייצרו מוצרים נייטרליים כגון 2,3-butanediol.

בדיקת Voges-Proskauer חושפת את יכולת המיקרואורגניזם ליצור אצטיל מתיל קרבינול (אצטון), מוצר ביניים של 2,3-butanediol בתנאים אירוביים.

אצטון מופחת וצורות 2,3-butanediol, אבל תגובה זו הפיכה, כך שאם 2,3-butanediol הוא מחומצן, אצטון נוצר. לכן, החמצן הוא חיוני.

Dipotassium פוספט הוא חיץ כי dampens את התערובת ב pH של 6.9 ± 0.2..

בסיס לפיתוח המבחן והפרשנות

כדי להדגים את התגובה, ההתפתחות צריכה להתבצע באמצעות שני ריאגנטים (Barriit ריאגנטים), המכונה Voges A ו Voges B.

Voges A הוא פתרון 5% של α-naphthol, ו V B B הוא 40% הידרוקסיד אשלגן הכנה. אם אשלגן הידרוקסיד אינו זמין, זה יכול להיות מוחלף על ידי 40% נתרן hydroxide.

Α-naphthol הוא זרז אשר יגדיל את עוצמת הצבע של התגובה, מה שהופך את הבדיקה רגישה יותר. Α-naphthol תמיד יש להוסיף הראשון, ערבוב הצינור כך המדיום בא במגע עם חמצן. בדרך זו את acetoin הנוכחי הוא מתחמצן diacetyl, ו -2,3 butanediol הוא מתחמצן כדי ליצור אצטון, עובר אותו diactel.

זה איך α-naphthol יהיה להיקשר diacetyl, אשר בתורו כבר מקושר הגרעין guanidine הנוכחי של חומצות אמינו arginine, האחרון מגיע pluripeptonas.

מצידה, אשלגן או hydroxide נתרן אחראי על ספיגת CO₂ ולהגיב עם פפטונים. תגובה זו גורמת להיווצרות של צבע ורוד סלמון, גלוי בבירור לאחר טלטול הצינור היטב.

עבור צבע להתרחש באופן מיידי, נכון כמויות של diacetyl, פפטון α-naphthol חייב להיות מעורב. אם זה לא יקרה, תן את הצינור לנוח במשך 15 דקות לפני לפרש.

בדרך כלל הבדיקה חיובית לאחר 2 עד 5 דקות, כאשר צבע ורוד חלש ניתן לצפות. אם נותר לנוח במשך 30 דקות עד 1 שעה את עוצמת הצבע יהיה מקסימלי (אדום עמוק).

בדיקה שלילית תופיע כאשר המרק צהוב. לאחר 1 שעה, אם הבדיקה היא שלילית, צבע נחושת יכול להיווצר כתוצאה של התגובה של הידרוקסיד אשלגן על α-naphthol.

הכנה

בינונית / סגן נשיא

שוקל 17 גרם של המדיום תרבות מיובש להתמוסס ליטר אחד של מים מזוקקים. תנו לעמוד במשך 5 דקות. מחממים עד רותחים להתמוסס לחלוטין. מגישים 3 עד 4 מ"ל בצינורות לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

המדיום תרבות מיובש הוא בז 'בינוני מוכן הוא ענבר בהיר.

ה- pH הסופי של המדיום הוא 6.9 ± 0.2.

Voges מגיב

שקול 5 גרם של α-naphthol ו להמיס 50 מ"ל של אלכוהול אתילי (מוחלט). בהמשך להמשיך להוסיף אלכוהול אתילי כדי להפוך עד 100 מ"ל.

מגיב Voges ב

שוקל 40 גרם של הידרוקסיד אשלגן ו להמיס 50 מ"ל של מים מזוקקים בכוס. זכוכית צריך להיות ממוקם באמבט מים קרים כדי לשלוט על הטמפרטורה, כי בזמן המסת הכנה עולה בחדות.

לאחר הפתרון הוא קר, הוא מועבר בלון בוגר והביא עד 100 מ"ל עם מים מזוקקים.

נוהל מבחן Voges-Proskauer

כדי לבצע את הבדיקה Voges-Proskauer, מרק RM / VP הוא מחוסן עם מיקרואורגניזם תחת מחקר, מתרבות טהורה של 18 עד 24 שעות.

את inoculum לא צריך להיות צפוף מדי. היא מודגרת ב 35-37 מעלות צלזיוס למשך 24 עד 48 שעות, אם כי הדגירה לפעמים יש צורך במשך כמה ימים. Cowan ופלדה מאמינים כי 5 ימים הוא זמן הדגירה המינימלי הדרוש כדי לזהות את כל סוגי Voges-Proskauer (VP) חיובי של המשפחה Enterobacteriaceae.

פיתוח המבחן

הפרדת aliquot מ"ל 1 לתוך צינור ולבצע חשף כדלקמן: מקום 12 טיפות (0.6 מ"ל) ריאגנט Voges ו 4 טיפות (0.2 מ"ל) Voges B. מיקס ולתת לעמוד להגזת במשך 5 - 10 דקות לפני ביצוע. עם זאת, אם הבדיקה עדיין שלילית באים לשבת ולצפות הצינור לאחר 30 דקות 1 שעה.

המראה של צבע ורוד אדום מציין שתגובת Voges-Proskauer חיובית. אם המדיום נשאר צהוב, התגובה היא שלילית.

תוספת של היזמים בסדר ובכמות המצוין היא חיונית כדי למנוע תשלילים שקר.

השתמש

מבחן Voges-Proskauer שימושי להבדיל בין זנים של E. coli אשר סמנכ"ל שלילי, של genla Klebsiella, Enterobacter, Serratia, בין היתר, אשר סמנכ"ל חיובי.

בקרת איכות

זנים בקרה ניתן להשתמש כדי לבדוק את האיכות של המדיום מוכן. Escherichia coli ATCC 25922, דלקת ריאות קלבסילה ATC 700603, פרוטאוס מיראביליס ATCC 43071, סלמונלה וטיפוריום אנטרוקטור קלואקא ATCC 13047.

התוצאות הצפויות הן חיוביות Voges-Proskauer התגובות רק עבור ק. דלקת ריאות ו E. cloacae. השאר נותנים תגובות שליליות.

הפניות

1. מעבדות בריטניה. MR-VP בינוני. 2015. זמין ב: www.britanialab.com
2. מעבדות Microkit M- זהות Voges Proskauer. 2014. זמין: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin ג 'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית. עריכה פנמריקנה. בואנוס איירס ארגנטינה.
4. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
5. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.