מאפייני חיידק בקטריאלי והכנה

ה חיידקים הוא הרחבה בצורת סרט דק של ההשעיה של מיקרואורגניזמים חיידקיים כי מתבצעת על זכוכית שקופה או שקופיות, עבור תצפית תחת מיקרוסקופ אופטי.

ההרחבה בצורה של הסרט מתבצעת על מנת להפריד בין מיקרואורגניזמים ככל האפשר, כי אם הם מקובצים התצפית אינה ברורה.

במחקר של טכניקות חיידקים חיידקים של הכנה מריחה, קיבוע וצבע משמשים לנתח אותם טוב יותר. בגלל הגודל הקטן של מיקרואורגניזמים, השימוש מיקרוסקופ אופטי נדרש בהכרח תצפית שלה.

המיקרוסקופים האופטיים הם כלים חיוניים להתבוננות במרחקים. אלה להשתמש בעדשות אופטיים אור המאפשר הדמיה של דגימות עם גידול גדול בגודל.

באופן כללי, לתאים חיים אין מבנים שצבעם הוא בעיקר, הנראים דרך המיקרוסקופ האופטי, הם דגימות חסרות צבע, שקופות, ומראים ניגוד פנימי קטן מאוד ועם סביבתם.

תצפית עם מיקרוסקופ שדה קל פשוט, ללא שימוש בטכניקות מכתים עזר, הוא מוגבל מאוד והוא משמש רק במקרים מסוימים, כמו תצפית של התנועה של מיקרואורגניזמים.

כדי לבחון את המיקרואורגניזמים בצורה אופטימלית, יש להשיג איזון בין ניגודיות לרזולוציה. את הפרטים של התאים לא ניתן לראות תחת מיקרוסקופ, אפילו ברזולוציה גבוהה; השימוש בצבעים נדרש באמצעות טכניקות מכתים, אשר מספקים ניגודיות תצפית.

אינדקס

• 1 מאפיינים של כתם חיידקי באיכות טובה
  • 1.1 ניגוד מעולה
  • 1.2 תיקון טוב
  • 1.3 מכתים טוב
• 2 הכנה
  • 2.1 א. פרוטיס
  • 2.2 תיקון
  • 2.3 ג מכתים פשוטים
  • 2.4 ד. שימור סופי של המריחה
• 3 הפניות

מאפיינים של כתם חיידקי באיכות טובה

בניגוד מעולה

כדי להשיג ניגוד מעולה יש מיקרוסקופים מתוחכמים שנקרא שלב מיקרוסקופ בניגוד, הפרעה הפרעות מיקרוסקופ שדה כהה. סוג זה של מיקרוסקופ משמש להתבונן מבנים חיידקיים כגון נדן ו נימים, בין היתר.

מכתים היא טכניקה פשוטה כדי להגדיל את הניגוד שהושג עם מיקרוסקופ שדה ברור. בטכניקה זו, צבעים שונים ניתן להשתמש כי ניכר לשפר את התצפית תחת המיקרוסקופ.

הכתמים עשויים ישירות על כתמים או הרחבות של השעיות של מיקרואורגניזמים על השקופיות, יבשים בעבר קבוע.

טוב לתקן

קיבוע היא טכניקה המשמשת לשימור מבנים תאיים; גורם איטום של מיקרואורגניזמים הידבקות לכוס של השקופית. ישנם טיפולים קיבוע שונים: קיבוע חום וקיבוע כימי.

קיבוע חום

זוהי השיטה המשמשת ביותר להתבוננות של חיידקים חיידקים. הטכניקה מורכבת מעובר את ההשעיה חיידקי של כתם על ידי להבה של מצית. טכניקה זו יכולה לשמר את המורפולוגיה החיצונית של חיידקים, אך הורסת מבנים פנימיים שלהם.

קיבוע כימי

קיבוע כימי משתמש בכימיקלים בשימור, כגון פורמלדהיד או פורמלדהיד, אתנול וחומצה אצטית, בין היתר. היתרון של שימוש בסוכנים תיקון כימי הוא כי השימור של מבנים הסלולר הפנימי של מיקרואורגניזמים מושגת.

מכתים טוב

ההליכים הנפוצים ביותר עבור מכתים התייבש יבש מראש קבוע הם מכתים חיובי או פשוט, מכתים דיפרנציאלי מכתים שלילי. יש גם טכניקות מיוחדות עבור מכתים מבנים תא מסוים (כמוסה, נבג, flagella).

מכתים חיובי או מכתים פשוטה

מכתים חיובית או פשוטה היא טכניקה הכתם המשמש ביותר כתם. משתמש בצבעים שיש להם את היכולת להיקשר מבנים מיקרוביאליים מסוימים, ומאפשר להם להיות תחת מיקרוסקופ.

צבעים אלה יש קבוצות chromophoric (חלק צבעוני) במבנה הכימי שלהם, עם לסירוגין כפולים איגרות חוב פשוט (הצמידה). קשרים אלה יכולים בתורו ליצור קשרים יוניים או קוולנטיים עם כמה מבנים סלולריים.

הצבעים המשמשים מכתים חיובי או פשוט הם בעיקר נגזרות כימיות של אנילין (מלחים אורגניים צבעוניים).

מצד שני, בין צבעים אנו יכולים למצוא כמה עם pH בסיסי ואחרים עם חומצה pH.

צבעי יסוד

בצבעים בסיסיים, קבוצת chromophore יש חיוב חשמלי חיובי. הרוב המכריע של מיקרואורגניזמים פרוקריוטים יש pH פנימי נייטרלי, ואת משטח התא שלהם הוא טעונה שלילית. באמצעות אינטראקציה אלקטרוסטטית זו, chromophore נקשר לתא וצובע אותו.

דוגמאות של צבעים בסיסיים הם מתילן כחול, קריסטל ויולט, מלכיט ירוק, fuscin בסיסי, safranin, בין היתר.

צבעי חומצה

בצבעים חומצי קבוצת chromophore יש מטען חשמלי שלילי. אלה משמשים מכתים של חלבונים עם קבוצות אמינו טעונה חיובי. דוגמאות של חומצה צבעים הם חומצה fuscin, עלה בנגל, קונגו אדום ו eosin.

מכתים דיפרנציאלי

הטכניקה של מכתים דיפרנציאלי מורכב החלת שני צבעים של צבע או עוצמה שונים, להבחין מיקרואורגניזמים שונים תחת המיקרוסקופ. כתם גרם כתמי התנגדות חומצה אלכוהול הם כתמים שונים המשמשים ביותר בקטריולוגיה.

כתם גרם משמש כמבחן ראשוני כדי לדעת את הצורה, גודל, קיבוץ התא, בנוסף לסוג של קיר התא. באמצעות בדיקת גרם הכתם, חיידקים עם קיר התא מסווגים כמו חיידקים חיוביים גראם וחיידקים גראם שלילי.

מכתים שליליים

בטכניקה זו צבעים כימיים משמשים כי לא לחדור הפנים הסלולר, אבל הם עושים את המדיום שבו מיקרואורגניזמים מופיעים כרקע שחור.

בטכניקה של מכתים שלילי, המריחה נעשית עם ירידה של השעיה של דיו סינית או nigrosine, אשר לאחר המאפשר ייבוש בטמפרטורות החדר בטמפרטורות הסרט אטום למעבר האור. בדרך זו, מיקרואורגניזמים הם נצפו כמו צורות בהירות על רקע כהה.

הכנה

א

1.- שטפו את השקופיות היטב, יבש עם נייר סופג ותווית אותם. על התווית לציין את תוכן ההכנה, התאריך והשם של האדם שעבד אותו.

2.- להדליק את המצית ולעקר את לולאה חיסון בלהבה עד חם אדום.

3.- תן את הידית מגניב.

4. - קח את הצינור של התרבות החיידקית, להסיר את מכסה במהירות לעבור את הפה של הצינור ליד הלהבה של המצית (להבה).

5.- הציג את לולאה חיסון בתוך הצינור המכיל את התרבות חיידקים לקחת את המדגם.

6. אם התרבות נמצאת במדיום נוזלי, מקמו את המדגם עם הידית במרכז השקופית והפיצו אותה בקפידה במעגל בקוטר של כ -2 ס"מ.

7.- לעקר מחדש את הלולאה חיסון.

8. לאפשר ייבוש של כתם באוויר.

9. חזור על שלבים 3 עד 8 שלוש פעמים.

10. אם התרבות נמצאת במדיום מוצק, טיפה של מים מזוקקים צריך להיות ממוקם בעבר על השקופית. זה נעשה כדי לערבב מדגם קטן של התרבות נלקח עם הידית חיסון, על פי אינדיקציות של צעדים 2 עד 5 (תנאי של אספרסיס).

11.- להרחיב את המדגם מדולל עם טיפת המים בשקופית וחזור שלוש פעמים.

תיקון

מוסיפים את המרקים היבשים, המיוצרים מתרבויות בנוזל נוזלי, שתי טיפות של מתנול או אתנול מוחלט.

2. אפשר ייבוש באוויר מן המצית.

3. אם המריחה מגיעה מתרבות במדיום מוצק, הריח היבש קבוע בחום, עובר אותו 2-3 פעמים במהירות דרך האזור החם ביותר של להבת המצית.

4. לגעת בחלק התחתון של המריחה עם החלק הגבי של היד השמאלית (לימין, אחרת להשתמש ביד ימין) ולבדוק את זה קר.

ג מכתים פשוטים

1. הוסף 2 טיפות של הצבע הנבחר למרוח ולתת לו לפעול במשך הזמן הנדרש בפרוטוקולים ספציפיים של כל צבע (בדרך כלל בין 1 ל 5 דקות).

2. - צבעים מסוימים דורשים שימוש בחום להפעלתם, ובמקרה זה יש צורך להיזהר מאוד בעת חימום השקופית בלהבת המצית (לתפעל אותו עם פינצטה ולהימנע רותחים). התחממות יתר של המריחה יכולה להרוס את התאים שאתה רוצה לראות.

3. הסר צבע עודף על ידי שטיפה עם מים מזוקקים מ picette. הסר את מי השטיפה על ידי הקשה עדינה על השקופית על הקצה שלה, מוטה על שולחן העבודה.

4. לאפשר ייבוש אוויר.

5. בהתאם לסוג התצפית, coverslip משמש או לא בשלב זה. את coverslip מגן ושומר על כתם. אם תצפית נעשה על ידי טבילה בשמן בשלב זה, לא coverslip משמש אך לא ניתן לשמור את כתם.

ד. שימור סופי של הכתם

1. - לטבול את המריחה ברציפות בכל אחד מהפתרונות המופיעים להלן, למשך 5 דקות לפחות. מטרת "אמבטיות" אלה היא להשאיר את המריחה מיובש לחלוטין. כל מגיב חייב להיות סחוט, לפני החדרת כתם באמבטיה הבאה.

הסדר של אמבטיות המייבש הוא כדלקמן:

1. אתנול 70%
2. 95% אתנול
3. אצטון טהור
4. מערבבים אצטון-קסיל 1: 1
5. Xilol

לאחר מכן לאפשר ייבוש האוויר.

2.- הר coverslip, רצוי 22 × 22 מ"מ, באמצעות בלזם קנדי ​​או אמצעים אחרים של הרכבה.

הפניות

1. בריגס, ג '(1965). גורמים סיבתיים בתאונות מעבדה מיקרוביולוגיות וזיהומים. צבא ארה"ב מעבדות ביולוגיות. פורט דטריק.
2. Cappucino, J. ו Welch, C.T. (2017). מיקרוביולוגיה: מדריך מעבדה. פירסון.
3. Holt, J. עורך (1977). מדריך ברגי קצר יותר של בקטריולוגיה דטרמיניבית. 8^ה בולטימור: ויליאמס ווילקינס Co.
4. Johnson, T.R. המקרים C.L. (2018). ניסויי מעבדה במיקרוביולוגיה. פירסון.
5. Tille, P. (2017). מיקרוביולוגיה אבחון. 14^ה סנט לואיס, ארה"ב: אלסיבר, Inc.