קרן אגר סבורוד, הכנה ושימושים

ה סבורוד אגר, ידוע גם בשם אגר סבראוד דקסטרוז, הוא בינוני תרבות מוצק, מועשר במיוחד לבידוד ופיתוח של פטריות, כגון שמרים, תבניות ו dermatophytes..

לכן, זה אומר לא יכול להיות חסר במעבדה מיקרוביולוגיה לחקור את נוכחותם של פטריות פתוגני או אופורטוניסטי, או מדגימות קליניים או לא קליניים. כמו כן, הוא אידיאלי גם לצמיחה של חיידקים filamentous כגון Streptomyces ו Nocardia. השימוש בו הוא רחב מאוד, ניתן להשתמש בו במיקולוגיה של האדם, החי והצומח.

מדיום זה נוצר בשנת 1896 על ידי רופא העור המפורסם ריימונד Sabouraud, שהפך למומחה בעל שם עולמי בהפרעות של הקרקפת, נגרמת בעיקר על ידי dermatophytes..

הקמתה היתה כה חשובה, כי היא שימשה מאז והיא ממשיכה היום, אם כי עם כמה שינויים.

למרות במיוחד עבור פטריות, חיידקים במדיום הזה הם יכולים לגדול, וכך עבור דגימות עם צמחייה מעורבת כולל אנטיביוטיקה נדרשת הכנה ובכך לעכב את הצמיחה של חיידקי הפלורה אשר רשאי להיות נוכח.

הבחירה של אנטיביוטיקה צריך להיעשות בזהירות לקחת בחשבון את סוג הפטרייה שאתה רוצה להתאושש, שכן כמה מעוכבים בנוכחות חומרים מסוימים.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 שילובים משומשים ביותר של אגר סבראוד דקסטרוז עם אנטיביוטיקה
• 2 הכנה
  • 2.1 דקסטרוז סבורוד אגר 
  • 2.2 Sabouraud Dextrose אגר (שינוי של אמונים)
  • 2.3 Sabouraud דקסטרוז אגר (שינוי של אמונים) עם chloramphenicol
  • 2.4 דקסטרוז Sabouraud אמונים אגר עם cycloheximide
  • 2.5 דקסטרוז Sabouraud אגר (אמונים) עם chloramphenicol ו cycloheximide
  • 2.6 אנטיביוטיקה אחרת שניתן להוסיף
• 3 שיקולים מיוחדים
• 4 בקרת איכות
• 5 שימושים
  • 5.1 עיבוד ראשוני
  • 5.2 ספורציה
  • 5.3 שימור
  • 5.4 תרבויות זעירות
  • 5.5 במיקולוגיה של האדם
  • 5.6 מיקולוגיה של בעלי חיים
  • 5.7 מייקולוגיה סביבתית
  • 5.8 מיקולוגיה תעשייתית
  • 5.9 מיקולוגיה של הצמח
• 6 הפניות

קרן

אגר סבראוד דקסטרוז הוא מדיום שבניסוח המקורי שלו הוא סלקטיבי חלש, בשל חומציות pH של 5.6 ± 0.2, אולם חיידקים עדיין יכול להתפתח, בעיקר incubations ממושכת.

המדיום מכיל קזאין פפטון ו לבלב מתעכל רקמה חיה, המספקים את הפחמן וחנקן המקור לפיתוח של מיקרואורגניזמים.

הוא מכיל גם ריכוז גבוה של גלוקוז, אשר משמש כמקור אנרגיה, לטובת הצמיחה של פטריות על חיידקים. הכל מעורבב עם אגר אגר, רכיב המספק את העקביות הנכון.

מצד שני, אבר סבראוד דקסטרוז עשוי להיות סלקטיבי אם אנטיביוטיקה מתווספים.

עם אנטיביוטיקה זה שימושי במיוחד בדגימות הפצע, כיבים פתוחים או כל מדגם שבו זיהום חיידקי גדול חשוד.

השילובים המשומשים ביותר של אגר סבראוד דקסטרוז עם אנטיביוטיקה

-אגר Sabouraud עם chloramphenicol: אידיאלי להחלמת שמרים ופטריות פילמנטיות.

-אגר Sabouraud עם גנטמיצין ו chloramphenicol: בדרך זו לגדול ביותר פטריות filamentous ושמרים, ומעכב מספר רב של חיידקים, כולל Enterobacteriaceae, Pseudomonas ו Staphylococcus.

-אגר Sabouraud עם cycloheximide: זה שימושי במיוחד עבור דגימות מן העור או בדרכי הנשימה, כל עוד החשד הוא פטריות dimorphic.

Cycloheximide יש להשתמש בזהירות; למרות שהוא משמש כדי לעכב את הצמיחה של פתוגני או פטריות סביבתיים או שמרים שעשויים להיות נוכחים כמו מדגם, הוא גם מעכב את הצמיחה של כמה פטריות כגון Cryptococcus neoformans,  אספרגילוס פומיגאטוס, אלשריה בודידי, פניצ'יליום פטריות אופורטוניסטיות אחרות.

-אבר Sabouraud עם chloramphenicol בתוספת cycloheximide: משמש בעיקר לבודד dermatophytes דימורפית ופטריות. יש לו את החסרון שהוא מעכב כמה מינים של פטריות אופורטוניסטיות כמו קנדידה לא אלביקנים, אספרגילוס, זיגומאיסטס או ג. ניאו-פורמנים.

-אגר Sabouraud עם chloramphenicol, סטרפטומיצין, פניצילין G ו cycloheximide: הוא אידיאלי עבור דגימות מאוד מזוהמים עם חיידקים ופטריות saprophytic, אך החיסרון שלה כי מעכב את הצמיחה של Actinomyces ו Nocardias, בנוסף לפטריות האופורטוניסטיות שהוזכרו לעיל.

הכנה

אם יש לך את החומרים בנפרד אתה יכול להכין את זה בדרך הבאה:

דקסטרוז אגר סבורו 

לשקול:

- 40 gr dextrose

- 10 גרם של פפטון

- 15 גרם של אגר אגר

- למדוד 1000 מ"ל של מים מזוקקים

כל החומרים מעורבים, ה- pH מותאם ל -5.6. ממיסים את המומס על ידי רותחים, להפיץ 20 מ"ל של המדיום צינורות של 25 x 150 מ"מ, ללא אוגן עם צמר גפן עדיף.

גודלי צינור אחרים יכולים לשמש גם, בהתאם לזמינות.

הם autoclaved במשך 10 דקות באווירה לחץ (121 ° C). אל תעבור את זמן החיטוי. כאשר עוזבים את החיטוי, צינורות מוטה עם תמיכה עד שהם לחזק בשיא חליל..

דרך נוספת היא לפזר את החומרים על ידי חימום עד שהוא רותח. ב Fiola אותו החיטוי במשך 10 דקות ולאחר מכן להפיץ 20 מ"ל בצלחת פטרי.

אם בינוני אגר סבראוד דקסטרוז זמין, אשר כבר מכיל את כל החומרים, אנחנו ממשיכים לשקול את הסכום שצוין על ידי בית מסחרי עבור ליטר אחד של מים. שאר השלבים זהים לאלה המתוארים לעיל.

דקסטרוז אגר Sabouraud (שינוי של אמונים)

לשקול:

-  20 gr דקסטרוז

- 10 גרם של פפטון

-  17 גרם של אגר אגר

-  למדוד 1000 מ"ל של מים מזוקקים

כל המרכיבים מעורבים, ה- pH מותאם ל -6.9. המשך באותו אופן כמו במקרה הקודם.

ישנם בתים מסחריים המציעים בינוני עם כל החומרים. במקרה זה, לשקול ולהכין כמתואר בתוספת.

סבוראדה דקסטרוז אגר (שינוי של אמונים) עם chloramphenicol

פתרון המניות Chloramphenicol

- שוקלים 500 מ"ג של בסיס כלוראמפניקול

- למדוד 100 מ"ל של אתנול 95%

- מערבבים

בינוני אגר סבראוד דקסטרוז (אמונס) מוכן כמתואר לעיל, בנוסף, עבור כל ליטר של בינוני, להוסיף 10 מ"ל של פתרון המניות chloramphenicol לפני החיטוי..

דקסטרוז אגר Sabouraud אמונים עם cycloheximide

פתרון המניות Cycloheximide

- שוקלים 5 גרם של cycloheximide

- למדוד 100 מ"ל של אצטון

- מערבבים

בינוני אגר סבראוד דקסטרוז (אמונים) מוכן כפי שתואר לעיל בנוסף לכל ליטר של בינוני להוסיף 10 מ"ל של פתרון המניות cycloheximide לפני החיטוי.

סבוראדה דקסטרוז אגר (אמונים) עם chloramphenicol ו cycloheximide

בינוני אגר דקסטרוז Sabouraud (אמונס) מוכנה כפי שתואר לעיל ועוד לליטר בינוני להוסיף 10 מ"ל של תמיסת chloramphenicol המניות 10 מ"ל של פתרון המניות cycloheximide לפני מעוקר.

אנטיביוטיקה אחרים שניתן להוסיף

20,000 עד 60,000 יחידות של פניצילין לליטר בינוני.

30 מ"ג סטרפטומיצין לליטר בינוני.

שניהם צריכים להיות משולבים לאחר מעוקר בינוני, מקורר במקצת (50-55 מעלות צלזיוס).

0.04 גרם של neomycin לליטר בינוני.

0.04 גרם של גנטמיצין לליטר בינוני.

שיקולים מיוחדים

מטעמי בטיחות הוא אגר דקסטרוז Sabouraud צמח מועדף צינורות בצורת טריז (שיא חליל נוטה) ולא בצלחות פטרי, כדי למנוע פיזור שאיפה של נבגים.

חשוב כי צינורות עם אבר Sabouraud להיות מכוסה כותנה ולא עם מכסה בורג, שכן הוכח כי התנאים semianaerobic לעכב את היווצרות נבגים בכמה זנים, למשל Coccidioides immitis. בנוסף, רוב הפטריות הן אירוביות.

אם אתה משתמש בכובע בורג, אל תסגור בחוזקה.

בקרת איכות

התקשורת מוכנה יש בקרת איכות כדי לוודא תפקוד תקין שלהם. לשם כך, זנים מסוימים שליטה נזרעים.

לקבלת אגר סבראוד דקסטרוז עם זנים ATCC chloramphenicol ניתן להשתמש. קנדידה אלביקנים, אשר חייב להיות צמיחה מעולה. צלחת נוספת הוא מחוסן עם זנים של אשריצ'יה קולי, חייב להיות מעוכב לחלוטין.

צלחת uninoculated מודגרת שבו אין מיקרואורגניזם צריך לגדול.

אבור דקסטרוז Sabouraud עם chloramphenicol ו cycloheximide ניתן להשתמש זנים של  טריגופיטון, חייב להתפתח היטב. צלחת נוספת הוא מחוסן עם זן של אספרגילוס פלאבוס, שבו חייב להיות גידול קטן או שום צמיחה. בנוסף, צלחת uninoculated מודגרת כדי להדגים את סטריליות.

עבור אגר סבראוד דקסטרוז עם cycloheximide, זנים של קנדידה אלביקנים, Trichophyton rubrum  o Microsporum canis, אשר אמור להראות צמיחה טובה.

כמו כן, זן של אספרגילוס פלאבוס, מראה צמיחה דל או לא צמיחה. לבסוף דגירה צלחת uninoculated לשליטה סטריליות.

שימושים

טיפוח ראשוני

קלאסי Sabouraud דקסטרוז אגר מכיל 4 גרם של דקסטרוז והוא מעולה כאמצעי בידוד העיקרי, שכן הוא מראה את המורפולוגיה האופיינית של כל פטרייה.

זה גם מעולה כדי להדגים את הייצור של פיגמנטים. עם זאת, זה לא האמצעי המתאים ביותר כדי לצפות sporulation.

זה גם לא מומלץ לגדול דלקתיות, אשר מעוכבת על ידי ריכוז גבוה של נוכחות גלוקוז.

מצד שני, יש לזכור שיקולים מסוימים לעיבוד.

כמה פטריות לפתח טוב יותר בטמפרטורת החדר, כגון תבניות, אחרים לפתח בהצלחה על 37 מעלות צלזיוס, כמו כמה שמרים, ואחרים יכולים להתפתח בשני טמפרטורות (פטורה דימורפית).

מסיבה זו, לפעמים יש צורך להשתמש כמה צלחות אגר Sabouraud עבור המדגם אותו, כפי שהם נטועים לעתים קרובות לשכפול דגירה צלחת אחת בטמפרטורת החדר ועוד צלחת ב 37 ° C..

לדוגמה, Sporothrix schenckii הוא נזרע בשתי צלחות; אחד מודגרת בטמפרטורת החדר כדי לקבל את שלב עובש והשני מודגרת על 37 מעלות צלזיוס כדי להשיג את השמרים כמו שלב, אבל האחרון יש להוסיף 5% של דם בינוני.

במקרים אחרים, כמו בדגימות של mycetomas, שתי צלחות של אגר Sabouraud נזרעים, אחד עם chloramphenicol והשני עם cycloheximide. הראשון יאפשר את הצמיחה של סוכני סיבתיות של mycetoma של מקור פטרייתי (Eumicetoma) ואת הסוכן הסיבתי השני של mycetomas ממוצא חיידקי, כגון actinomycetomas..

ספורציה

אגר דקסטרוז Sabouraud שונה על ידי אמונס מכיל 2 גרם של דקסטרוז והוא אינו משמש רק לבידוד, אלא גם עבור sporulation ושימור של פטריות.

במדיום זה אם אתה יכול לשחזר זנים של דלקתיות.

שימור

כדי לשמור על תרבויות פטרייתי ניתן לאחסן במקרר (2-8 מעלות צלזיוס). זמן האחסון יכול להשתנות בין שבועיים ל -8 שבועות. לאחר זמן זה הם חייבים להיות subcultured לחזור על התהליך.

כמה פטריות נשמרים בצורה הטובה ביותר בטמפרטורת החדר, כגון Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. Violaceum ו מיקרוספורום.

תחזוקה של המתח יכול להיות מוארך כדי למנוע pleomorphism אם דקסטרוז מוסר לחלוטין מן אגר ואם כמות אגר במדיום הוא ירד כדי למנוע יובש.

מיקרו-תרבויות

עבור זיהוי של כמה פטריות פילמנטית יש צורך לבצע microcultures באמצעות אגר Sabouraud או אמצעים מיוחדים אחרים כדי לבחון את המבנים של רבייה מינית לא מינית.

במיקולוגיה של האדם

הוא משמש בעיקר לאבחון מחלות פטרייתיות, במיוחד אלו המשפיעות על העור ועל ההחזקות שלו (שיער ומסמרים).

הדגימות עשויות להיות הפרשות, exudates, עור, שיער, מסמרים, כיח, CSF או שתן. הפתוגנים המבודדים בדרך כלל הם דרמטופיטים, פטריות הגורמות לזיהומים פטרייתיים תת-עוריים ומערכתיים.

מיקולוגיה של בעלי חיים

בעלי חיים מושפעים לעתים קרובות על ידי זיהומים פטרייתיים, כך אגר Sabouraud הוא שימושי כמו בבעלי חיים כמו מיקולוגיה האדם..

לדוגמה, dermatophytes יכול לעתים קרובות להשפיע על בעלי חיים. כך הוא מיקרוסקופורום canis עיוות var, כי לעתים קרובות מדביק כלבים, חתולים, סוסים, חזירים וקופים. כמו כן, גבס מיקרוסקורום מדביק כלבים, חתולים ובקר.

ציפורים כגון תרנגולות, תרנגולים ותרנגולות מושפעות מיקרוסקופרום גלינה.

פטריות אחרות, כמו זימונמה, הם גם הגורם למחלות אצל בעלי חיים, בעיקר בסוסים, פרדות וחמורים, מה שהופך דלקת חשובה בכלי הלימפה.

Sporothrix schenkii ו Histoplasma capsulatum משפיעים על חיות בית ואדם.

מיקולוגיה סביבתית

פטרייה פתוגנית או אופורטוניסטית יכולה להתרכז בכל זמן נתון בסביבה מסוימת, במיוחד בחדרי ניתוח ובטיפול נמרץ (ICU) של מרפאות ובתי חולים. לכן, יש צורך לשלוט בהם.

חללים פגיעים אחרים הם ספריות ומבנים ישנים, אשר יכולים להיות מושפעים על ידי ריכוז של פטריות סביבתיות.

ב מחקרים סביבתיים אבור דקסטרוזה Sabouraud משמש לבידוד של פטריות.

מיקולוגיה תעשייתית

אבור סבראוד דקסטרוז אינו יכול להיות חסר עבור המחקר של מזהמים פטרייתיים בייצור של מוצרי קוסמטיקה, מזון, משקאות, עור, טקסטיל, בין היתר.

הצמח מיקולוגיה

הצמחים סובלים גם ממחלות הנגרמות על ידי פטריות, המשפיעות על חלקים שונים של הצמח, אשר יכול אפילו לסיים את הקציר, גרימת הפסדים גדולים בחקלאות.

הפניות

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). אבחון מיקרוביולוגי של המיקוזות ומחקרים רגישות לפטריות. המלצות האגודה הספרדית למחלות זיהומיות ומיקרוביולוגיה קלינית. זמין בכתובת: coesant-seimc.org
2. מעבדת ואלטק. (2009). סאבוראדה דקסטרוז אגר עם cycloheximide. זמין ב: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). מיקולוגיה וטרינרית. האוניברסיטה האגררית הלאומית. ניקרגואה.
4. פורבס B, סחם D, Weissfeld A. 2009. אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. ארגנטינה Panamericana S.A העריכה
5. קאסאס רינקון ג 'כללי מיקולוגיה. 1994. 2nd Ed. אוניברסיטת Universidad דה ונצואלה, מהדורות ספריה. ונצואלה, קראקס.