פאפא דקסטרוז יסוד, הכנה ושימוש

ה אגר דקסטרוז פאפא הוא מוצק, לא סלקטיבי בינוני תרבות מזין. זה יכול לגדל מינים חיידקים ופטריות, אבל השימוש בו הוא ציין במיוחד עבור בידוד של פטריות פילמנטיות שמרים. זה ידוע גם בינוני בינוני על ידי ביטוי אנגלי תפוחי אדמה דקסטרוז אגר.

זה שימושי במיוחד לבידוד של פטריות phytopathogenic, כלומר, אלה המשפיעים על הצמחים. כדי לשתול את דגימות מן צמחים נגועים, מדיה אחרים כגון אגר Sabouraud או אגר מלטה ניתן להשתמש, עם זאת, לשימוש שגרתי, אגר דקסטרוז תפוחי אדמה הוא העדיף בגלל sporulation גדול..

הוא משמש גם לספירת מושבות פטרייתיות בדגימות של מוצרי קוסמטיקה, תרופות וכמה מוצרי חלב. כמו כן, הוא נלהב דגימות צמח של גרוטאות העור בחיפוש של dermatophytes, אשר גדלים היטב במדיום זה, לפתח פיגמנטים אופייניים שלהם.

בינוני דקסטרוז תפוחי אדמה הוא מאוד פשוט וקל להכין במעבדה. הוא מכיל, כפי שהשם מרמז, עירוי תפוחי אדמה, דקסטרוז ו אגר אגר. בנוסף חומרים מעכבים ניתן להוסיף כדי למנוע צמיחה חיידקים להגדיל סלקטיביות עבור מינים פטרייתיים.

אינדקס

• 1 קרן
• 2 הכנה
  • 2.1 - תוצרת בית (לא מסחרי) הכנה של אגר papa dextrose
  • 2.2 - הכנה מסחרית של אגר פפה דקסטרוז
• 3 שימושים
  • 3.1 תהליך לשתילת דגימות צמח על אגר דקסטרוז תפוחי אדמה
  • 3.2 תהליך לשתילת דגימות של עור, שיער או קשקשים מסמר על אגר papa dextrose
  • 3.3 הליך זיהוי
  • 3.4 ספירת המושבה
  • 3.5 תחזוקה של זנים פטרייתיים
• 4 בקרת איכות
• 5 הפניות

קרן

אגר papa dextrose הוא בינוני תרבות המספק את האלמנטים התזונתיים הדרושים לפיתוח של פטריות נימים שמרים.

השילוב של עירוי תפוחי אדמה עם גלוקוז מספק את מקור האנרגיה המושלם עבור גידול משביע רצון של פטריות. בעוד אגר הוא אחד המספק עקביות לסביבה.

המדיום לבדו אינו מעכב את הצמיחה של חיידקים, ולכן הוא בינוני לא סלקטיבי. כדי להפוך את זה סלקטיבי אתה צריך תוספת של חומרים מעכבים כגון חומצה טרטרית או אנטיביוטיקה.

הכנה

-תוצרת בית (לא מסחרי) הכנת אגר דקסטרוז תפוחי אדמה

צלחות פטרי

הוא מוכן באופן הבא:

קודם כל, תפוחי אדמה נשטפים היטב, להסיר את הלכלוך שיש להם. הם נחתכים לפרוסות דקות עם כל קליפה. 200 גרם של תפוחי אדמה הם שקלו והניח לרתיחה בליטר של מים מזוקקים במשך חצי שעה.

לאחר זמן מסונן או מתוח כל הכנה באמצעות גזה.

הנוזל המתקבל מסתיים במים מזוקקים עד שהוא מגיע לליטר אחד. כדי עירוי, 20 גרם של אגר אגר 20 גרם של דקסטרוז מתווספים, מעורבב היטב autoclaved ב 121 מעלות צלזיוס, על 15 קילו של לחץ במשך 15 דקות.

אפשר להתקרר ל 50 מעלות צלזיוס ומגיש בצלחות פטרי סטריליות. צלחות מוכנות מאוחסנות במקרר.

דפנות

אתה יכול גם להכין papa dextrose אגר טריזים.

במקרה זה, לפני עיקור החיטוי, 12 עד 15 מ"ל של המדיום ממוקמים צינורות, ואז הם autoclaved ועל העזיבה הם שוכבים על תומך מיוחד עד מוצק. שמור במקרר.

המדיום נשאר ב pH של 5.6 ± 0.2, עם זאת, כמה מעבדות להוסיף 10% חומצה טרטרית כדי להוריד את ה- pH ל 3.1 ± 0.1 על מנת לעכב צמיחה חיידקי.

במובן זה, מעבדות אחרות מעדיפות להוסיף אנטיביוטיקה כדי להפוך אותה לסלקטיבית לטיפוח פטריות ולמנוע התפתחות חיידקית.

-הכנה מסחרית של אגר דקסטרוז תפוחי אדמה

לשקול 39 גרם של המדיום זמין מיובש מסחרית להתמוסס ליטר אחד של מים מזוקקים. השאר לנוח 5 דקות.

התערובת מחוממת על ידי ערבוב לעתים קרובות עד להמסה מוחלטת. מעוקר לאחר מכן החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

צלחות או טריזים ניתן להכין. המשך כמתואר למעלה.

ה- pH נשאר על 5.6 ± 0.2. אם ה- pH של 3.1 הוא הרצוי, 14 מ"ל של חומצה טטרית 20% סטרילי יש להוסיף לפני ההגשה על הצלחות..

צבעו של המדיום הלא מוכן הוא בז 'ומוכן הוא ענבר בהיר עם מראה מעונן מעט או opalescent.

שימושים

תהליך לשתילת דגימות צמח אגר דקסטרוז תפוחי אדמה

-עבור עלים עם כתמים

העלים נחתכים לחתיכות.

בתוך כוס 50cc עם אלכוהול 50%, במקום חתיכות העלים (חתיכות מוכתמות ובריא), כדי לחטא את פני השטח למשך 20 עד 30 שניות. משוך את האלכוהול ולהוסיף 20% נתרן hypochlorite במשך 40 עד 50 שניות אם הם עלים דק ולהגדיל את הזמן עד 80 שניות אם זה קליפה ויומנים.

משוך את hypochlorite נתרן ולקחת עם קליפ סטרילית את חתיכות מחטא ומניחים אותם על פני השטח של המדיום (מקסימום של 10 חתיכות). מניחים את תאריך דגירה מ 20 עד 30 מעלות צלזיוס.

-לקבלת פירות פקעות

אם הפרי הוא בשרני, לפתוח את הפרי מושפע על ידי הפטרייה ולקחת חתיכות עם אזמל סטרילי, הן את החלק הנגוע ואת החלק הבריא ולמקם אותו על פני השטח של אגר.

אם הפרי הוא פרי הדר, כגון לימון או תפוז, אתה צריך לפתוח לזרוע את הזרעים.

כאשר פני השטח של הפרי מושפע נבגים הם נצפו, עדיף להשתמש בשיטה מגורד על הצלחת; זה מורכב לגעת נבגים עם מרית בצורה של "L" מעוקרים מקורר, ולאחר מכן לבצע זריעת זיגזג 2 עד 3 פעמים על אגר.

-עבור דגנים

הם מחטאים כמתואר בעלים ולאחר מכן הניח על אגר.

-עבור ענפים וגבעולים

גירוד הקליפה מבוצע ולאחר מכן חלקים של החלק הבריא והחולה נלקחים ונזרעים ישירות על האגר..

לוחות נזרע מודגרת ב Aerobiosis ב 20-30 מעלות צלזיוס למשך 72 שעות.

תהליך לשתילת דגימות של עור, שיער או קשקשים מסמר על אגר papa dextrose

את המדגם יש לקחת באמצעות להב סכין מס '11, או לחתוך שיער מושפע, פתיתי עור או מסמרים בחיפוש אחר dermatophytes. לפני נטילת המדגם, האזור צריך להיות מחטא עם אלכוהול 70%.

-דוגמת עור

ב נגעים קשקשים את קצה הנגע יש לגרד, כמו יש סיכוי גבוה יותר למצוא את הפטרייה.

ב נגעים exudative המדגם נלקח עם ספוגית יבשה או רטובה. לזרוע מיד אגר דקסטרוז תפוחי אדמה או אגר Sabouraud. הימנע אמצעי התחבורה.

שיטה נוספת של דגימה היא דרך השטיח מרובע הטכניקה של מריאט ו Adan Campos. במקרה זה האזור המושפע הוא שפשף 5 פעמים עם פיסת צמר סטרילית לטיפוח נוסף.

המדגם ניתן למקם ישירות במדיום התרבות.

-מדגם שיער

בהתאם הפתולוגיה, החלק המושפע עשוי להיות מנותק או קרוע על ידי השורשים. מניחים את המדגם במדיום התרבות.

-מדגם הציפורן

אתה יכול לגרד או לחתוך חלק מסוים של הציפורן מושפע. זה יהיה תלוי בסוג של פגיעה.

חותכים את המדגם לחתיכות 1 מ"מ לפני זריעה על מנת להגדיל את הסבירות של מגע של הפטרייה עם המדיום התרבות.

הליך זיהוי

המושבות שהתקבלו בצלחת מבודדים צינורות המכילים אגר דקסטרוז תפוחי אדמה לבצע את המחקר macroscopic של המושבות (מראה, צבע, עקביות, מידת ההתפתחות)..

המחקר המיקרוסקופי (תצפית על מבנים ותצורותיהם) יכול להיעשות באמצעות מיקרו-תרבויות או תצפית ישירה מתחת למיקרוסקופ שבין למינה ללמלה.

ספירת המושבה

מדיום זה יכול לשמש גם כדי לקבוע את העומס של פטריות שמרים הנוכחי דגימות צמח, מזון, קוסמטיקה או סמים. לשם כך, אגר papa dextrose בתוספת אנטיביוטיקה משמש, כגון: (chloramphenicol, chlorotetracycline או שניהם).

יוצקים 1 מ"ל של המדגם - דילול רצוי - לתוך צלחת פטרי סטרילית ריק, ואז להמיס אגר דקסטרוז תפוחי אדמה תפוח ולתת מגניב 45 ° C. יוצקים מעל צלחת פטרי לסובב עד homogenized. השאירו אותו במנוחה עד שהוא יתגבש.

דגירה ב Aerobiosis ב 20-25 מעלות צלזיוס (תבניות) או 30-32 מעלות צלזיוס (שמרים) במשך 5 עד 7 ימים או יותר, בהתאם לסוג הפטרייה להיות מבוקש ואת סוג המדגם. שתי צלחות ניתן להשתמש כדי לדגור בשני טווחי הטמפרטורה.

תחזוקה של זנים פטרייתיים

אגר papa dextrose ניתן להשתמש כדי לשמור על זנים פטריית קיימא במשך כמה שנים.

כדי לעשות זאת, פטרייה מעובד ב papa dextrose אגר טריזים ופעם פטריות הוא גדל, הוא מכוסה בשמן מינרלי. השמן חייב להיות מעוקר בתוך החיטוי במשך 45 דקות, ויש להם צמיגות משוער של 300 עד 330 Saybolt. השמן צריך לחצות את קצה שפוע של 1 עד 2 ס"מ.

בקרת איכות

מכל אצווה מוכנה אחת או שתי צלחות יש לקחת מודגרת על 25 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות או 20 מעלות צלזיוס למשך 96 שעות. שליטה טובה סטריליות היא אחת שבה אין התפתחות של מושבות.

גם ידוע או מוסמך זנים כגון:

Saccharomyces cerevisiae ATC 9763, קנדידה אלביקנים אטק 10231, אספרגילוס ברסילינזיס ATCC 16404, טריגופיטון ATCC 9533. בכל המקרים צמיחה טובה צפויה.

הפניות

1. מעבדות בריטניה. פאפא גלוקוזאדו אגר. 2015. זמין ב: britanialab.com
2. מעבדות Neogen אגר תפוחי אדמה דקסטרוז. זמין ב: foodsafety.neogen.com
3. מעבדת אינסומולב אגר דקסטרוז תפוחי אדמה. זמין ב: insumolab.cl
4. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
5. קאסאס רינקון ג 'כללי מיקולוגיה. 1994. 2nd Ed. אוניברסיטת Universidad דה ונצואלה, מהדורות ספריה. ונצואלה, קראקס.
6. Aceituno מ 'הערכה של איכות מיקרוביולוגית ב Eyeshadow, אבקת קומפקטית סוג של מעבדה הפקה ארצית, על פי Pharmacopeia Usp הפניה שיטה 2005. תזה כדי להיות זכאי לתואר כימאי רוקחות. אוניברסיטת סן קרלוס דה גואטמלה.
7. Cuétara מ עיבוד של דגימות פני השטח. מגזין Iberoamerican Mycology. 2007; עמ ' 1-12