אגר מילר קרן הינטון, הכנה ושימושים

ה Müeller הינטון אגר זהו בינוני מזין, לא סלקטיבי מזין, המורכב עירוי בשר, פפטון חומצה קזאין, עמילן, אגר ומים מזוקקים. מדיום זה מאפשר פיתוח מיקרוביאלי מעולה של רוב החיידקים הגדל במהירות.

זה היה במקור נוצר על ידי ג 'ון הווארד Müeller ו ג' יין הינטון לבודד חיידקים תובעניים מבחינה תזונתית, כגון נייסריה גונוראהי ו נייסריה מאניטיטידיס. עם זאת, בשל המאפיינים שלו התברר להיות אידיאלי לחקר הרגישות לאנטיביוטיקה, מתן תוצאות אמין לשחזור.

לכן, אגר מולר הינטון הוא מדיום התרבות המקובל על ידי מכון התקנים קליניים ומעבדתיים (CLSI) ועדה אירופאית על מיקרוביאלית רגישות בדיקה לביצוע בדיקות רגישות מיקרוביאלית ידי דיסק שיטת דיפוזיה קירבים באואר.

אינדקס

• 1 קרן
• 2 הכנה
• 3 שימושים
  • 3.1 טכניקה אנטימיקרוביאלית
  • 3.2 מיקום אסטרטגי של דיסקים על אגר Müeller Hinton
• 4 סיבות לתוצאות שגויות
• 5 הגבלה
• 6 בקרת איכות
• 7 הפניות

קרן

בגלל זה הוא מדיום תזונתי שאינו סלקטיבי, זה מצוין לצמיחה של חיידקים פתוגניים ביותר.

מצד שני, הרכב פשוט שלה הופך את החומרים לפזר בקלות על זה, להיות מאפיין חיוני למבחן רגישות על ידי שיטת הדיפוזיה הדיסק..

מאפיין נוסף שלה הוא כי הוא מכיל כמות נמוכה של מעכבים, המאפשר sulfonamides, trimethoprim ו tetracyclines להיות מוערך באופן יעיל..

עם זאת, יש לזכור כי המדיום חייב לעמוד בתנאים מסוימים כדי להבטיח את תפקודו התקין, כולל:

התאמת PH, עומק אגר וריכוז הולם של תימין, תימידין, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ ו Zn⁺⁺.

אנו חייבים גם לדעת כי המתודולוגיה היא סטנדרטית ולכן יש לעמוד בכל הפרמטרים, כגון:

ריכוז בידוד, ריכוז ושימור דיסקים אנטיביוטיים, אך צבת המספר המתאים של דיסקים על אגר, המרחק בין דיסק ושם אסטראטגי אחר של אנטיביוטיקה מסוימת, את האווירה, הטמפרטורה וזמן הדגירה.

הכנה

שוקל 37 גרם של המדיום מיילר היינטון מיובש להתמוסס 1 ליטר מים מזוקקים. מחממים את המדיום תוך ערבוב כדי לעזור להמיס אותו. בואו להרתיח במשך 1 דקה.

קח את החיטוי לעקר ב 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. בעת הסרת החיטוי, Fiola צריך להיות ממוקם באמבט מים ב 50 מעלות צלזיוס כדי להתקרר. יוצקים 25 עד 30 מ"ל לתוך צלחות פטרי סטרילית 10 ס"מ קוטר.

הצלחות צריך להיות ממוצע עובי של 4 מ"מ (אידיאלי), עם טווח של 3-5 מ"מ מותר.

אם זה רצוי להכין אגר דם באמצעות בסיס אגר Müeller Hinton, 5% דם טלה סטרילית ו defibrinated הוא שפך לפני ההגשה על הצלחות..

ה- pH הסופי של המדיום צריך להיות בין 7.2 ל -7.4.

להשקיע לאחסן במקרר, עד לשימוש. אפשר לצלחת לקחת טמפרטורת החדר לפני השימוש.

צבע המדיום מוכן הוא בז 'בהיר.

שימושים

הוא משמש לביצוע בדיקה אנטיביוטראמית או אנטיביוטיקה רגישות לרוב הפתוגנים שאינם צומחים במהירות.

אם אגר הוא הוסיף עם דם, הוא משמש לבצע את אנטיביוגרפיה של תובעני מיקרואורגניזמים כגון: סטרפטוקוקוס דלקת ריאות, המופילוס, נייסריה מאניטיטידיס, בין היתר. זה גם שימש לבודד ליגונלה פנאומפיליה.

טכניקת אנטיביוגרפיה

לפני ביצוע אנטיביוגרפיה, פתרון חיידקי שווה 1.5 x 10 חייב להיות מוכן⁸ תאים.

כדי לעשות זאת, לקחת 3 עד 4 מושבות מהתרבות טהורה מושעים בתוך trypticase סויה מרק או מרק מולר הינטון, וטופח במשך 2 עד 6 שעות ו הריכוז הותאם עם מלח סטרילית, לעומת מקפרלנד רמה 0.5%.

אם הם דורשים מיקרואורגניזמים, מושבות ניתן להשעות ישירות עד שהם מגיעים לריכוז של 0.5% של Mac Farland. לאחר מכן, צלחת Müeller Hinton הוא נזרע עם ספוג ספוג עם פתרון חיידקי מוכן.

כדי לעשות זאת, טובלים את המקלון בתמיסה ולאחר מכן להסיר את הנוזל עודף על ידי לחיצה על הקירות של הצינור. מיד לאחר המקלון הוא עבר על פני השטח כולו, בלי להשאיר אתרים untouched, ואז לסובב מעט את הצלחת מחדש לזרוע. הפעולה חוזרת על עצמה פעמיים נוספות.

תן לעמוד במשך 10 דקות ולאחר מכן מניחים את הדיסקים האנטיביוטיים במלקחיים סטריליים, ומשאירים ביניהם רווח של 24 מ"מ. לאחר הצבת כל דיסק על אגר הקש קלות כל אחד עם מהדק כדי להבטיח שהם דבקים היטב.

לאחר התהליך, הצלחת היא הפוכה מודגרת ב 35-37 מעלות צלזיוס ב Aerobiosis עבור 16-18 שעות. אם זה מיקרואורגניזם תובעני, זה עשוי לדרוש microaerophilia ואם אנטיביוגרפיה מכיל דיסקים oxacillin זה צריך להיות לקרוא בשעה 24 שעות.

סרגל משמש למדידת קוטר של כל הילה. התוצאות צריכות להירשם ב- mm. לאחר מכן, הערכים שהתקבלו מתואמים עם טבלאות של נקודות חיתוך שפורסמו על ידי המדריך הנוכחי CLSI.

דווח רגיש (S), ביניים (אני), או עמיד (R), לפי העניין.

אנטיביוטיקה נבחרת על פי המיקרואורגניזם המבודד וסוג ההדבקה המתרחשת.

לפעמים המיקום האסטרטגי של אנטיביוטיקה צריך להיחשב להראות דפוסי התנגדות פנוטיפי.

מיקום אסטרטגי של דיסקים על אגר Müeller Hinton

עבור enterobacteria, הדיסק חומצה clavulanic חייב להיות ממוקם מול 3 ו 4 הדור cephalosporins. התפשטות בצורת ביצה מצביעה על כך שהמתח הוא מפיק של בטא-לקטאמס (ESBL). משמעות הדבר היא כי המטופל לא צריך להיות מטופל עם כל cephalosporin.

ב Staphylococcus חשוב למקם את אריתרומיצין או דיסק azithromycin מול הדיסק clindamycin (D- מבחן).

הילה עמיד ב erythromycin ו שטוחה הילה clindamycin עולה כי המתח יש התנגדות inducible כדי clindamycin, זן (RIC). משמעות הדבר היא כי טיפול עם clindamycin לא יהיה יעיל.

חיפוש עבור זנים AMP C מושרה ב Enterobacteriaceae וכמה החיידקים הלא תוסס גראם שליליים, דיסקים ceftazidime, cefoxitin או tazobactam piperacillin מול פנים דיסק אימיפנם במרחק של 27 מ"מ.

הילה שטוחה באחת הדיסקים מול imipenem מציין נוכחות של AMP C.

עבור החיפוש עבור AMP C מכונן, דיסק cloxacillin 500 מיקרוגרם מתמודד עם ceftazidime (30 מיקרוגרם) ועם cefotaxime (30 מיקרוגרם), במרחק של 25 מ"מ. הילה מורחבת באחד מהצפלוספורינים מצביעה על חיוביות.

הדיסק cloxacillin יכול גם להיות מוחלף על ידי דיסק 9 מ"מ ווטמן מס '6 מסנן נייר ספוג עם חומצה פניל ​​פניל ​​(400 מיקרוגרם) עם מרחק של 18 מ"מ. הוא מתפרש כמו הקודם.

לבסוף, כדי לחקור את הייצור של metallo-beta-lactamases, במיוחד ב Pseudomonas aeruginosa, דיסק ספוגים בשימוש עם 10 .mu.l של חומצה ethylenediaminetetraacetic (EDTA 750 גרם) וחומצה thioglycolic (SMA 300 מ"ג), הפונה דיסקים אימיפנם ו meropenem, במרחק של 15 מ"מ.

הבדיקה חיובית אם יש הרחבת ההילה imipenem או meropenem כלפי דיסק EDTA / SMA. תוצאה זו חייבת להיות מאושרת על ידי מבחן Hodge שהשתנה.

שיטה זו מורכבת inoculating זן של Escherichia coli ATCC 25922 על צלחת Müeller Hinton. דיסק imipenem ממוקם במרכז הצלחת ולאחר מכן חליל הוא עשה מן הדיסק לכיוון הפריפריה עם המתח של פ aeruginosa חשוד אתה יכול לבדוק עד 4 זנים לכל צלחת.

המבחן יהיה חיובי אם יש אזור עיוות של ההילה imipenem סביב הסטוריה.

גורם לתוצאות שגויות

-דיסקים של אנטיביוטיקה משומש גרוע יכול לייצר התנגדות שקר. לדוגמה, דיסק oxaxillin הוא פגיע מאוד לשינויים בטמפרטורה.

-PH של המדיום מתחת המצוינת (חומצה) מייצר הילות קטנות אמינוגליקוזידים ו macrolides (סיכון של התנגדות שווא), ו הילות גדולות פניצילין, טטרציקלין ו novobiocin (סיכון של רגישות שווא).

-אם ה- pH מעל האמור (אלקליין) ההשפעות שתוארו לעיל היפוך.

-מדיה עם ריכוזים גבוהים של תימין ו תימידין משפיעה באופן משמעותי על צמצום ההילות של עיכוב של sulfonamides ו trimethoprim.

-ריכוז גבוה של סידן ומגנזיום מייצר התנגדות שקר של aminoglycosides, polyyxin B ו tetracyclines נגד זנים של Pseudomonas aeruginosa.

-ריכוזים נמוכים של סידן ומגנזיום מייצרים רגישות שקר של aminoglycosides, polyyxin B ו tetracyclines נגד זנים של Pseudomonas aeruginosa.

-נוכחות של אבץ משפיע על התוצאות של carbapenems דיסקים (imipenem, meropenem ו ertapenem).

-עובי המדיום מתחת 3 מ"מ מייצר תוצאות רגישות כוזבות, בעוד עובי מעל 5 תיצור התנגדות שקר.

-הגיוס של הדיסקים באנטיביוגרמה ייתן הילות מעוותות, שכן פריקה אנטיביוטית מיידית.

- חלבונים חלשים מאוד משפיעים על התוצאות, שכן לא תהיה צמיחה אחידה או confluent אגר, תנאי הכרחי כדי להיות מסוגל למדוד את אזורי עיכוב, בנוסף לכך ההילות יכול לתת גדול מהרגיל.

-יתר על המידה inocula יכול לתת Haloes קטן מהרגיל.

-לא לכבד את המרחק בין הדיסקים גורם הילה אחת חפיפה אחרת ולא ניתן לקרוא כראוי.

-דגירה עם CO₂ מגדילה את גודל ההילות של טטרציקלין ודיסקים מתיקילין.

-הדגירה בטמפרטורות מתחת ל 35 מעלות צלזיוס מייצרת הילות גדולות יותר.

-תוספת הדם מקטינה את גודל ההילה של הסולפונאמידים.

הגבלה

הרגישות של אנטיביוטיקה שהוכחה באנטיביוגרפיה מול המיקרואורגניזם (במבחנה) היא לא ערובה שזה יעבוד in vivo.

בקרת איכות

כדי לדעת אם המדיום מכיל את הסכום הנכון של תימין, זן צריך להיות נזרע של אנטוקוקוס פקאליס ATCC 29212 ולבדוק את הרגישות trimethoprim sulfamethoxazole (SXT), זה צריך לתת הילה שווה או> 20 מ"מ כדי להיות משביע רצון.

הפניות

1. "אגר מולר-הינטון". ויקיפדיה, האנציקלופדיה החופשית. 16 נובמבר 2018, 12:23 UTC. 27 בינואר 2019, 04:22
2. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
3. Cona E. תנאים למחקר רגישות טובה על ידי בדיקת דיפוזיה אגר. Rev Chil להדביק, 2002; 19 (2): 77-81
4. מעבדת דייקו פרנסיסקו סוריה מלגיזו. Müeller Hinton אגר עם 5% כבשים דם. 2009. זמין בכתובת: http://f-soria.es
5. בי.די מילר הינטון II אגר מעבדה. 2017. זמין ב: .bd.com
6. מעבדות בריטניה. Müeller הינטון אגר. 2015. זמין ב: britanialab.com
7. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas סוג AmpC: כללי ושיטות גילוי פנוטיפי. L מפעל מיקרוביול. 2009; 29 (2): 78-83. זמין ב: scielo.org.
9. Perozo A, Castellano M, Ling E, Arraiz N. זיהוי פנוטיפי של metallobetalactamases מבודדים קליניים של Pseudomonas aeruginosa. קסמרה, 2012; 40 (2): 113-121. זמין ב: scielo.org.