חצי בסיס ה- SIM, הכנה ושימושים

ה חצי SIM זהו אגר semisolid ו דיפרנציאלי, שתוכננה במיוחד כדי לסייע בזיהוי של כמה חיידקים, בעיקר של Enterobacteriaceae המשפחה. הוא מורכב טריפטין, פפטון, סולפט ברזל, אמוניום סולפט, נתרן thiosulfate ו אגר.

מדיום זה מאפשר ביצוע של שלושה מבחנים חשובים: ייצור מימן גופרתי (H₂S), היווצרות אינדול תנועתיות, ומכאן את ראשי תיבות ה- SIM. בשל התועלת הרבה שלה זה לא יכול להיות חסר במעבדה חיידקים.

בניגוד לתקשורת אחרת, זה חייב להיות חצי מוצק כך קיבולת התנועה של חיידקים מסוימים הוא לזיהוי. במובן זה, בדיקה זו פועלת היטב עבור Enterobacteriaceae, אך לא ב- bramilli שלילי של גראם, ללא תסיסה, שם היא מעדיפה להשתמש בשיטות אחרות, כגון, למשל, את הירידה הממתינה.

מדיום ה- SIM מאפשר להבחין בין מאפיינים ספציפיים מסוימים המאפיינים כמה חיידקים ביחס לאחרים. לדוגמה Escherichia coli היא נבדלת על ידי היותה H₂S (-), Indole (+) והתנועה (+), בעוד פרוטאוס מיראביליס זה H₂S (+), indole (-), תנועתיות (+).

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 מקור מתח
  • 1.2 ייצור מימן גופרתי
  • 1.3 היווצרות אינדול
  • 1.4 ניידות
• 2 הכנה
  • 2.1 חצי SIM
  • 2.2 מגיב של קובאק
  • 2.3 ארליך מגיב
• 3 שימושים
  • 3.1 זרעים
• 4 בקרת איכות
• 5 מגבלות
• 6 הפניות

קרן

זהו מדיום תרבותי הנחשב לדיפרנציאלי, משום שהשימוש בו מצליח להבחין בין מיקרואורגניזמים המסוגלים לייצר מימן גופרתי מאלה שאינם עושים זאת; גם מדגיש את אלה טופס indole מ טריפטופן של אלה שאינם יוצרים את זה, ולבסוף מבדיל את המוטציה מן החיידקים נייח.

מקור כוח

כמו כל מדיום תרבות, יש לו אלמנטים המספקים את החומרים המזינים הדרושים כך שאינם דורשים מיקרואורגניזמים יכולים להתפתח. אלמנטים אלה מיוצגים על ידי peptones ו tripteína.

הפיתוח של המיקרואורגניזם בסביבה הוא חיוני כדי להיות מסוגלים לבחון את הנוכחות או היעדר המאפיינים המוערכים על ידי המדיום.

ייצור מימן גופרתי

האות S של ראשי תיבות ה- SIM מתייחסת לייצור מימן גופרתי (H₂S). חיידקים המסוגלים ליצור מימן גופרתי ייקח את הגופרית של thiosulfate נתרן.

לאחר H נוצר₂S - גזים חסרי צבע - זה מגיב עם מלח ברזל נוכח בינוני, גפרתי ברזל יצרו, נראה בבירור (משקע שחור). חיידקים שאינם יוצרים H₂S, לעזוב את האמצע של הצבע המקורי (בצבע בז ').

הנוכחות של המשקע השחור יכולה לעכב את הפרשנות של תנועתיות. עם זאת, ידוע כי רוב H- הפקת enterobacteria₂S הם תנועתיות חיובית, כגון סלמונלה, פרוטאוס ו Citrobacter. בנוסף, המשקע השחור המכסה כמעט את כל המדיום, מציע תנועתיות חיובית.

אימון האינדולה

המכתב השני של ה- SIM ראשי תיבות הוא "אני", המייצג את היווצרות של אינדול.

במובן זה, tripteína, בנוסף להיותו מקור של מזין, ממלא תפקיד בסיסי נוסף. זה פפטון עשיר חומצת אמינו בשם טריפטופן, ולכן, זה יכול להראות את החיידקים המייצרים טריפטופנאז.

אנזים זה אחראי לקיצוץ טריפטופן החומצה האמינית, עם היווצרות האינדולה (חומר חסר צבע), חומצה פירובית ואמוניום..

לכן, כדי להדגים את התגובה הזאת יש להוסיף חומר מגלה (מגיב ארליך או מגיב של קובאק). או שאדם מגיב עם האינדול, ויוצר חומר דמוי טבעת בצורת פוקסיה אדומה על פני האגר. אם הטבעת פוקסיה מופיע מבחן אינדול מתפרשת חיובית.

חיידקים שאין להם אנזים זה, לא יצרו את הטבעת ויפורשו כמבחן אינדול שלילי.

חשוב לציין כי מבחן האינדול צריך להיות האחרון לפרש, שכן לאחר הוספת מגיב, המדיום הופך מעונן מקשה על דמיינו את תנועתיות.

תנועתיות

לבסוף האות "M" של המילה SIM פירושה תנועה. על מנת להיות מסוגלים להעריך את תנועתיות, המדיום הזה הוא אסטרטגי מוצק למחצה, כי המאפיין הזה הוא חיוני כדי להיות מסוגל לבחון אם יש תנועה חיידקית או לא. החיידקים שיש להם flagella הם אלה שנותנים את הבדיקה החיובית.

בדיקה חיובית תהיה ברורה כאשר עכירות הוא ציין, הן inoculum הראשונית, ומסביבו. בעוד, חיידקים שאינם ניידים רק לפתח נתיב inoculum הראשונית.

הכנה

חצי SIM

שוקלים 30 גרם של המדיום מיובש להתמוסס ליטר אחד של מים מזוקקים. התערובת נשארת לעמוד במשך 5 דקות ולאחר מכן מחומם רותח, ערבוב לעתים קרובות עד מומס לחלוטין..

להפיץ את תערובת מבחנות עם מכסה כותנה החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. הסר את המדף צינור מן החיטוי ולאפשר לו לחזק במצב זקוף, כך המדיום הוא בצורת בלוק..

לאחסון, הוא נשאר במקרר עד שהוא משמש. המדיום מוכן חייב להיות pH הסופי של 7.3 ± 0.2.

ברגע של חיסון המדיום, זה חייב להיות בטמפרטורת החדר. צבעו של המדיום הוא בז '.

מגיב של קובאק

למדוד 150 מ"ל של אלכוהול אמיל או isoamyl או butyl. (השתמש באחד משלושת המוזכרים).

ממיסים 10 גרם של dimethylaminobenzaldehyde p. לאחר מכן, לאט להוסיף 50 מ"ל של חומצה הידרוכלורית מרוכזת.

מגיב מוכן לשימוש הוא חסר צבע או צהוב בהיר. זה צריך להישמר בתוך בקבוק ענבר מאוחסנים במקרר. אין להשתמש אם זה לוקח צבע חום כהה; אשר מציין כי הוא פגום. מגיב זה הוא העדיף כאשר עוסקים enterobacteria.

ארליך מגיב

לשקול 2 גרם של dimethylaminobenzaldehyde p ו להמיס 190 מ"ל של אלכוהול אתיל מוחלט לערבב לאט עם 40 מ"ל של חומצה הידרוכלורית מרוכזת. שמור את המגיב של Kovac באותו אופן. מגיב Ehrlich משמש יותר עבור חיידקים שאינם תוסס אנאירובי.

שימושים

מדיום ה- SIM הוא מאוד בשימוש במעבדות בקטריולוגיה. יש לו יתרון כי באותה צינור שלוש תכונות חיוניות ניתן להבחין בזיהוי של Enterobacteriaceae.

נזרע

הדרך הנכונה לזרוע את המדיום הזה היא באמצעות המחט, שבה חלק מהמושבה הטהורה להילמד נלקח ומוכנס במרכז המדיום אנכית. יש לבצע דחף אחד. לנקב לא צריך להגיע לתחתית הצינור, הדבר הנכון הוא לכסות רק שני שלישים של עומק.

לא מומלץ לחזור על החידלון, שכן זה יכול להוביל פרשנויות שווא של תנועתיות חיובית. בינוני מחוסן מודגרת ב Aerobiosis ב 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות.

סיכם את הזמן הוא ציין אם היה או לא ייצור של H₂S ו תנועתיות הוא קרא. לבסוף נחשף האינדול, מוסיף 3 עד 4 טיפות של Ehrlich או מגיב של Kovac, הוא מעורבב בעדינות לפרש.

בקרת איכות

כבקרת סטריליות, אחת או שתי צינורות מודגרת ללא חיסון בתנור על 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. זה צפוי כי לאחר זמן זה לא תהיה צמיחה או שינוי של צבע.

כבקרת איכות, זנים ידועים ידועים ניתן להשתמש, כגון: Escherichia coli ATCC 25922, אנטרוקטין ATCC 13048, דלקת ריאות קלבסילה ATCC 13883, סלמונלה טיפימוריום ATCC 14028, שיגלה סוני ATC 29930, פרוטאוס וולגאריס ATCC 13315.

התוצאות הצפויות הן: Escherichia coli ח₂S שלילי, indole ו תנועתיות חיובית, אנטרוקטין רק תנועתיות חיובית, סלמונלה טיפימוריום ח₂S ו תנועתיות חיובית, עם אינדול שלילי. פרוטאוס וולגאריס כל חיובי, בעוד דלקת ריאות קלבסילה ו שיגלה סוני כל שלילי.

מגבלות

-כמה זנים של Morganella מורגני, בין זנים אחרים יכולים לייצר פיגמנט חום במדיום זה בשל ייצור של מלנין, זה לא צריך להיות מבולבל עם המשקע של ברזל גופריתי. באנשי מקצוע לא מנוסים מצב זה יכול ליצור חיוביות שגויות בפרשנות של מבחן H₂S.

-חיידקים אירוביים קפדניים רק לגדול על פני השטח של הצינור, מה שמקשה על לפרש את התנועה.

הפניות

1. מעבדות BD BBL SIM בינוני. 2008. זמין בכתובת: bd.com
2. מעבדות Neogen מדיום SIM. זמין ב: foodafety
3. דייקו פרנסיסקו סוריה מלגיזו. מדיום SIM. 2009. זמין בכתובת: http://f-soria.es
4. מעבדת מעבדת בריזואלה מדיום SIM. זמין בכתובת: .brizuela-lab.com
5. מעבדות בריטניה. מדיום SIM. 2015. זמין ב: studyres.es/doc
6. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.