MIO בסיס בינוני, הכנה ושימושים

ה חצי MIO הוא מבחן ביוכימי המשמש כדי לסייע בזיהוי מינים של חיידקים השייכים Enterobacteriaceae המשפחה. זה די מזין ומורכב גלוקוז, שמרים לחלץ, פפטון, טריפטין, L-oritithin hydrochloride, סגול bromocresol ו אגר.

המשמעות של ראשי התיבות שלה (MIO) מתארת ​​כל אחד מהפרמטרים שניתן לראות במדיום זה; תנועתיות, אינדולה ואורניתין. תנועתיות היא היכולת של מיקרואורגניזם לנוע על ידי נוכחות של flagella. על מנת זה נכס להיות שנצפה, העקביות של המדיום חייב להיות חצי מוצק, ולכן ההכנה יש כמות פחות אגר..

ייצור אינדול המעיד על נוכחות של אנזים tryptophanase הפועל בחומצה האמינית טריפטופן, המחייב את השימוש ריאגנט בפיתוח ייצור אינדול גלוי.

לבסוף, Ornithine קובע אם החיידק מסוגל decarboxylating חומצת האמינו, כלומר, אם יש לו את decarboxylase decinboxylase אנזים.

אינדקס

• 1 קרן
  • 1.1 פפטון, תמצית שמרים וטריפטין
  • 1.2 תנועתיות
  • 1.3 גלוקוז
  • 1.4 L-Ornithine
  • מחוון pH 1.5
• 2 טכניקת זריעה ופיתוח
• 3 הכנה
  • 3.1 MIO בינוני
  • 3.2 מגיב קובאץ '(מפתח בדיקות אינדול)
• 4 השתמש
• 5 בקרת איכות
• 6 הפניות

קרן

פפטון, שמרים לחלץ טריפטין

אלמנטים אלה תורמים לכוח התזונתי של המדיום. הם משמשים כמקור של חומרים מזינים וחומצות אמינו חיוניות לפיתוח בקטריאלי.

יתר על כן, trypticase הוא מקור של טריפטופן להראות נוכחות של אנזים tryptophanase, אשר מדרדרת דיאמינציה רדוקטיבי אינדול טריפטופן שחרור, פירובט, אמוניה ואנרגיה.

אינדול הוא חסר צבע, כך הנוכחות שלה מתגלה על ידי הוספת חמש טיפות של ריאגנט ארליך או קובאץ, שניהם עם p-dimethylaminobenzaldehyde.

קבוצת אלדהיד של המתחם הזה מגיב עם אינדול, יצירת טבעת בצורת פוקסיה אדום המוצר על פני אגר.

כל זכר של צבע צריך להיחשב עדות חיובית. את המבחן יש לקרוא מיד, כי אחרי כמה זמן את צבע degrades.

מצד שני, המבחן הזה צריך להיות חשוף לאחר שהקליט את התוצאות של תנועתיות decarboxylation של אורניתין..

פרשנות

מבחן חיובי: היווצרות של טבעת פוקסיה אדומה בעת הוספת קובאץ טיפות מגיב.

בדיקה שלילית: אין יצירת טבעת.

תנועתיות

היכולת של החיידק לזוז תהיה עדות אם בינוני עכור הוא ציין או אם יש קו עבה של צמיחה המתרחב סביב החיסון הראשונית.

בדיקת תנועתיות שלילית תהיה עדות על ידי התבוננות בקו דק של צמיחה, וכל סביב יהיה ללא צמיחה.

חשוב לקרוא את תנועתיות לפני לחשוף את האינדול, שכן תוספת של עננים מגיב כל המדיום.

בקטריות ניידות אך איטיות, קשה להוכיח את תנועתן עם המדיום הזה. במקרה זה מומלץ להשתמש בבדיקות או בשיטות אחרות, כגון מדידת התנועה או שיטת הירידה.

גלוקוז

גלוקוז הוא פחמימות תוססת כי בנוסף לאספקת אנרגיה acidifies את המדיום, תנאי הכרחי עבור decarboxylation של חומצה אמינית ornithine להתרחש.

התסיסה של גלוקוז צריך תמיד להתרחש, על פי העיקרון כי כל החיידקים השייכים למשפחה Enterobacteriaceae תסיס גלוקוז.

L-Ornithine

אם החיידק מייצר את דנרבוקסילאז האנזים אורניטין, הוא עשוי לפעול ברגע המדיום כבר acidified על ידי התסיסה של גלוקוז.

אנזים אורניטין decarboxylase פועל על קבוצת carboxyl של חומצת אמינו לייצר אמין בשם putresine כי alkalizes בינוני שוב.

יש לקרוא את המבחן לאחר 24 שעות של הדגירה, מכיוון שאם תנסה לקרוא לפני שתוכל לפרש את הבדיקה בצורה שגויה.

יש לזכור כי התגובה הראשונה המתרחשת היא התסיסה של גלוקוז, כך המדיום הופך צהוב בשלב הראשוני (הראשונה 10 עד 12 שעות). אם decarboxyllation של אורניתין לאחר מכן מתרחשת, המדיום יהפוך סגול.

חשוב לפרש את הבדיקה decarboxylation אורניתין לפני חשיפת אינדול, שכן תוספת של מגיב קובאץ משנה את צבעו של המדיום.

פרשנות

בדיקה שלילית: צהוב בינוני או עם רקע צהוב.

מבחן חיובי: סגול לחלוטין.

מחוון PH

במקרה זה סגול bromocresol משמש; האדם האחראי על החשיפה כשיש שינוי ב- pH באמצע. כאשר מחומצן, מחוון הופך צהוב, וכאשר אלקליזציה הופך סגול.

זרע ופיתוח הטכניקה

כדי לשתול את המדיום MIO, לולאה ישר או מחט משמש עם זה חלק המושבה להילמד נאסף..

נקב עמוק נעשה במדיום MIO בקו ישר. זה לא מומלץ לבצע ניקוב כפול, כפי שהוא יכול לתת תמונה תנועתיות שקר אם נקבים לא מבוצעות באותו מקום.

דגירה של 24 עד 48 שעות ב 37 מעלות צלזיוס ב Aerobiosis. לבחון את התוצאות בסדר זה: תנועתיות, decarboxylation של אורניתין ולבסוף לחשוף את האינדול.

רצוי להסיר בסביבה נקייה מחיידקים 2 מ"ל של מדיום, טרנספוזיציה אותו צינור סטרילי ולבצע שם את המבחן אינדול, כך שאם זה נותן שלילי יכול לדגור שאר הצינור המקורי עבור 24 שעות, שוב כדי לחשוף אינדול.

ההתפתחות של אינדולה מתבצעת באופן הבא: 3 עד 5 טיפות של מגיב Kovacs מתווספים בינוני MIO ו נרגש במרץ. הוא ציין אם טבעת פוקסיה אדום מופיע או לא.

הכנה

חצי MIO

לשקול 31 גרם של המדיום MIO ו להתמוסס ליטר אחד של מים מזוקקים.

מחממים עד התערובת רותח במשך דקה אחת, תוך ערבוב לעתים קרובות עד אגר הוא מומס לחלוטין. הפץ 4 מ"ל של המדיום 13/100 מבחנות עם מכסה כותנה.

לעקר החיטוי על 121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. הסר מן החיטוי ולתת לו לעמוד ישר במעמד, בצורה כזו כי גוש מוצק למחצה נוצר.

חנות במקרר 2-8 ° C. אפשר למזג לפני שתילת זן חיידקי.

צבעו של המדיום המיובש הוא בז 'וזה של המדיום מוכן סגול מעט סגול.

ה- pH הסופי של המדיום מוכן הוא 6.5 ± 0.2

המדיום הופך צהוב עם pH חומצי הוא סגול ב pH אלקליין.

Kovacs מגיב (Indole מבחן המפתחים)

מגיב זה מוכן כדלקמן:

150 מ"ל של אמיל, isoamyl או אלכוהול butyl (כל השלושה) נמדדת. בו 10 גרם של p dimethylaminobenzaldehyde מומסים. לאחר מכן 50 מ"ל של חומצה הידרוכלורית מרוכזת מתווספים לאט.

מגיב מוכן הוא חסר צבע או צהוב בהיר. זה צריך להיות מאוחסן בתוך בקבוק ענבר והוחזק במקרר. צבע חום כהה מראה את הידרדרותה.

גם מגיב קובאץ 'יכול להיות מוחלף על ידי מגיב ארליך. זה האחרון, להיות רגיש יותר, הוא העדיף לחשוף אינדול חיידקים המייצרים אותו בכמויות מינימליות, כמו כמה גראם שלילי שאינם תסיסה bacilli מסוימים anaerobes.

השתמש

מדיום זה הוא מבחן המשלים סוללה של בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים השייכים למשפחה Enterobacteriaceae.

הנתונים דה carboxylation של אורניתין משמש להבדיל שיגלה סוני, זה נותן חיובי, של Shigella Boydii, Shigella flexneri ו- S. dysenterieae, כי לתת שליליות.

זה גם מבדיל את סוג Klebsiella, אשר נותן שלילי, סוג Enterobacter, שבו רוב המינים שלה הם חיוביים.

בקרת איכות

בכל פעם אצווה של המדיום MIO מוכן, בדיקת שליטה יכול להתבצע. לשם כך, זנים ידועים או מאושרים משמשים להתבוננות בהתנהגות המדיום.

הזנים שניתן להשתמש בהם הם Escherichia coli, Morganella morganii, דלקת ריאות קלבסילה, ו פרוטאוס מיראביליס.

התוצאות הצפויות הן קוליי ומ 'מורגני. דן M +, I + ו- O: +.

דלקת ריאות קלבסילה נותן את כל שלילי (M: -, אני: -, O :-). פרוטאוס מיראביליס ו אנטרוקטין dan M: + I: - ו- O: +.

הפניות

1. Mac Faddin ג 'יי (2003). בדיקות ביוכימיות לזיהוי חיידקים בעלי חשיבות קלינית. מהדורה שלישית. עריכה פנמריקנה. בואנוס איירס ארגנטינה.
2. פורבס ב ', סחם ד', וייסנפלד א. (2009). אבחון מיקרוביולוגי של ביילי & סקוט. 12 ed. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
3. Koneman E, אלן S, Janda W, Schreckenberger P, Win W. (2004). אבחון מיקרוביולוגי. מהדורה חמישית. עריכה Panamericana S.A. ארגנטינה.
4. מעבדות בריטניה. MIO Medio 2015. זמין ב: britanialab.com
5. מעבדות BD BBL תנועה Indole Ornithine (MIO) בינוני. 2007. זמין בכתובת: bd.com
6. מעבדות ואלטק מ.י. תנועה, אינדול, אורנית'ין. 2010. זמין ב: andinamedica.com